Reichwald, K.、Hatzack, F.
“修改的 Haug 和 Lantzsch 方法应用于大豆、小麦和玉米粉中快速准确的光度植酸盐测定”
《农业化学与食品化学杂志 (Journal of Agricultural and Food Chemistry)》,第 56 卷第 9 期,第 2888-2891 页。(2008)

摘要

用于快速光度植酸测定的修改版本 Haug 和 Lantzsch 方法应用于大豆、小麦和玉米粉中植酸盐的分析。与原始方案相比,巯基乙酸毒性试剂的用量大大降低,从而将实验室人员的潜在健康风险降至最低。对豆粕的不同提取条件进行了测试,并发现必须煮沸至少 30 分钟,才能去除豆粕提取物中的干扰化合物。根据修改的 Haug 和 Lantzsch 方法测定的植酸盐含量与通过测定总沉淀磷或通过敏感和特异性高性能离子色谱得到的含量没有差别。证明了在主要饲料底物(包括基于大豆的结构性植物蛋白)中进行植酸盐分析的修改方法的适用性和准确性。© 2008 美国化学学会。

 

Olesen, K.-M.、Hansen, S.H.、Sidenius, U.、Schmiegelow, K.
“高效液相色谱荧光检测法测定白细胞 DNA 6-硫鸟嘌呤核苷酸水平”
《色谱杂志 B:生物医学和生命科学中的分析技术 (Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences)》,第 864 卷第 1-2 期,第 149-155 页。(2008)

摘要

开发了测定 DNA 6-硫鸟嘌呤核苷酸的 HPLC 方法。从外周血分离白细胞 DNA,用氯乙醛衍生,通过在 pH 6.0 和 80 °C 下水解 60 分钟从 DNA 主链释放形成的亚乙烯基衍生物 N2,3-亚乙烯基-6-硫鸟嘌呤 (εG)、1,N6-亚乙烯基腺嘌呤 (εA) 和 N2,3-亚乙烯基鸟嘌呤 (εG)。通过固定金属离子亲和色谱法 (IMAC) 提取 ε6TG 后,通过离子对反相 HPLC 和荧光检测分析样品。定量限为 9.0 nM,日内和日间精密度范围为 2.8 至 15.5%。在 8 例急性淋巴细胞白血病 (ALL) 儿童小型队列中,每 3000 个正常基(范围 1:2000-1:11000)的中位数为一个 6-硫鸟嘌呤碱基。© 2008 Elsevier B.V. 保留所有权利。

 

Gizzi, G.、Thyregod, P.、Von Holst, C.、Bertin, G.、Vogel, K.、Faurschou-Isaksen, M.、Betz, R.、Murphy, R.、Andersen, B.B.
“饲料中植酸酶活性的测定:实验室间研究”
《国际公职分析化学师协会志 (Journal of AOAC International)》,第 91 卷第 2 期,第 259-267 页。(2008)

摘要

进行实验室间研究以确定用于测定饲料样品中植酸酶活性的新方法的性能特征。该方法基于在定义的试验条件下从底物植酸酶释放无机磷酸盐的原理,并且已经验证其是否适用于测量各种植酸酶产物的酶活性。应用了该研究的两种不同实验设计,允许分别在重复性、中间精度和重现性条件下预估方法的精度。重复性相对标准偏差 (RSDr) 为 2.2 -10.6%,重现性 RSD (RSDR) 为 5.4 - 15%。证实了验证方法对于预期目的的适用性。在本研究中验证方法所获得的性能谱与专门验证一种植酸酶产品的类似方法相当。

 

Zarnkow, M.、Mauch, A.、Back, W.、Arendt, E.K.、Kreisz, S.
“黄米 (Panicum miliaceum L.):使用扫描电子和共焦激光显微镜对制麦过程中胚乳的微观结构变化进行评价”
《酿造学会志 (Journal of the Institute of Brewing)》,第 113 卷第 4 期,第 355-364 页。(2007)

摘要

采用扫描电子显微镜 (SEM) 和共焦扫描激光显微镜 (CLSM) 研究制麦过程中胚乳的微观结构变化。SEM 是研究黄米淀粉颗粒微观结构和制麦过程变化特征的合适工具。可以观察到位于接近胚胎的粉状胚乳中的淀粉颗粒早期可见降解(24 小时后)。由于这种降解,使用共焦扫描激光显微镜,观察到这部分胚乳的密度包装较低。在透明内胚乳中淀粉颗粒的降解在不同的制麦后期(78 小时)是明显的,并且检测到小颗粒 (<2.5 μm) 的优先攻击。SEM 或 CLSM 均不能检测到蛋白质结构的变化。© 2007 The Institute of Brewing & Distilling。

 

Poulsen, L.K.、Pedersen, M.H.、Dufva, M.
“芯片上的变态反应学”
《临床与实验变态反应 (Clinical and Experimental Allergy》,第 37 卷第 12 期,第 1736-1737 页。(2007)

Kim, K.-H.、Brown, K.M.、Harris, P.V.、Langston, J.A.、Cherry, J.R.
“通过二维页面凝胶活性试验和串联质谱发现烟曲霉 β-葡萄糖苷酶的蛋白质组学策略”
《蛋白质组学研究杂志 (Journal of Proteome Research)》,第 6 卷第 12 期,第 4749-4757 页。(2007)

摘要

目前,以经济上有竞争力的方式通过酶水解和发酵从木质纤维素生物质中生产乙醇受到限制,一定程度上是由于将纤维素水解成可发酵糖所需酶的成本相对较高,效率较低。发现具有更大活性的新型纤维素酶可能是克服这种成本障碍的关键一步。β-葡萄糖苷酶催化葡萄糖聚合物转化为葡萄糖的最后一步。尽管非常重要,但只有少量 β-葡糖苷酶是市售的,并且显然需要更高效的 β-葡糖苷酶。我们开发了一种蛋白质组学策略,旨在发现存在于纤维素降解菌烟曲霉的分泌蛋白质组中的 β-葡糖苷酶。使用部分或完全蛋白质变性条件,将分泌蛋白质组以 2DGE 格式分级,并且在用水解后发出荧光的底物类似物灌注后,在凝胶中检测到 β-葡糖苷酶活性。荧光斑点进行胰蛋白酶消化,并通过串联质谱法确认鉴定为 β-葡糖苷酶。通过这种原位活性染色法识别了烟曲霉的两个新型 β-葡萄糖苷酶,并克隆了一个新型 β-葡萄糖苷酶基因编码 (EAL88289),并进行了异源表达。表达的 β-葡糖苷酶表现出比先前表征的黑曲霉和米曲霉的 β-葡糖苷酶高得多的热稳定性。改进的热稳定性对于开发能够在高温下进行快速纤维素水解反应的下一代糖化酶是非常重要的,由此降低了生物乙醇生产的成本。本文描述的原位活性染色方法将是一个有用的工具,以高通量的方式编目和评估 β-葡萄糖苷酶的效率。© 2007 美国化学学会。

 

Råvik, M.、Cimander, C.、Elofsson, U.、Veide, A.
“基于表面等离子体共振的微生物细胞表面指纹图谱分析方法”
《生化与生物物理方法杂志 (Journal of Biochemical and Biophysical Methods)》,第 70 卷第 4 期,第 595-604 页。(2007)

摘要

建议使用表面等离子体共振 (SPR) 的微生物细胞表面指纹图谱分析方法。已经使用四种不同大肠杆菌突变体作为模型细胞。当细胞悬浮液流过表面时,细胞表面指纹图谱通过细胞突变体与四个不同表面之间产生相互作用的登记而产生,具有不同的物理和化学性质。观察到一些突变体之间指纹图谱的显著差异。同时,使用微电泳、接触角测量和水相两相分配测定细胞表面的物理性质,并与 SPR 指纹进行比较。产生的细胞表面指纹和物理性质数据通过多元数据分析进行评估,显示使用主成分分析图 (PCA) 以类似的方式将细胞分成单独组。© 2007 Elsevier B.V. 保留所有权利。

 

Haack, M.B.、Lantz, A.E.、Mortensen, P.P.、Olsson, L.
“在用产生米曲霉菌株的脂肪酶培养期间获得的在线多波长荧光测量的化学计量分析”
《生物技术与生物工程 (Biotechnology and Bioengineering)》,第 96 卷第 5 期,第 904-913 页。(2007)

摘要

丝状真菌米曲霉以分批和分批补料法培养,以研究使用多波长荧光监测丝状真菌培养期间的事件过程。应用的米曲霉菌株表达来自疏棉状嗜热丝孢菌的真菌脂肪酶。使用 BioView® 系统(DELTA,丹麦)每 5 分钟收集一次多波长荧光光谱,并建立探索性和预测性模型,将荧光数据与细胞质量和脂肪酶活性相关联。在培养期间,米曲霉显示分散的菌丝生长,并且在这些条件下没有观察到多波长荧光传感器的结垢。基于荧光光谱的平行因子分析 (PARAFAC) 模型的得分给出了诸如补料阶段开始等事件的明确证据。估计细胞质量的预测模型显示在 0.73 和 0.97 之间的相关性,交叉验证的均方根误差 (RMSECV) 值在 1.48 和 0.77g·kg-1 之间。分批补料培养也建立了估算脂肪酶活性的模型,相关系数为 0.93。本文给出的结果清楚地表明,多波长荧光是监测分批补料培养丝状真菌的有用工具。© 2006 Wiley Periodicals, Inc.

 

Sonesson, A.W.、Callisen, T.H.、Brismar, H.、Elofsson, U.M.
“双极化干涉 (DPI) 和表面等离子体共振 (SPR) 之间用于蛋白质吸附研究的比较”
《胶体和表面 B:生物界面 (Colloids and Surfaces B: Biointerfaces)》,第 54 卷第 2 期,第 236-240 页。(2007)

摘要

开展这项工作的目的是比较从最近开发的双极化干涉 (DPI) 与完善的表面等离子体共振 (SPR) 技术得到的蛋白质吸附结果。两种技术均使用消逝场作为传感元件,但是使用完全不同的方法来计算吸附质量。作为测试系统,我们使用了来自疏棉状嗜热丝孢菌 (TLL) 的脂肪酶在 C18 表面上的吸附。使用两种技术计算的吸附量是非常一致的,在 TLL 浓度为 1000nM 或更高时,两条吸附等温线均在 1.30-1.35 mg/m2 下饱和。因此,这支持使用 SPR 和 DPI 作为研究蛋白质吸附的工具,这在比较使用不同技术获得的吸附数据时是非常重要的。由于在 SPR 中的斑点传感,这种技术被推荐用于初始动力学研究,而当吸附层的折射率和厚度更受关注时,DPI 更准确。© 2006 Elsevier B.V. 保留所有权利。

Houmøller, L.P.、Kristensen, D.、Rosager, H.
“使用 NIRS 测定酶促酯化油的 SFC、FFA 和等效反应时间”
《塔兰塔 (Talanta)》,第 71 卷第 2 期,第 868-873 页。(2007)

摘要

研究了使用近红外光谱 (NIRS) 快速测定在 70 °C 下使用固定化绵毛嗜热丝孢菌脂肪酶获得的棕榈硬脂、椰子油和菜籽油共混物的酯交换程度。酯交换是通过使用固定床和间歇式反应器进行的。开发了用于定量测定 10、20、30、35 和 40 °C 下的固体脂肪含量 (SFC) 和游离脂肪酸 (FFA) 的校准,得到的预测均方根误差分别为 1.0、1.3、1.4、1.6、1.7 和 0.19% (w/w)。数据显示,NIRS 可以用来取代传统方法,测定植物油中的 FFA 和 SFC。通过预测 NIR 光谱中间歇式反应器的等效反应时间,可以监测用于人造奶油酯交换的固定化酶的活性。两种不同油混合物在 300 和 170 分钟进行酯交换的预测均方根误差分别为 21 和 12 分钟。© 2006 Elsevier B.V. 保留所有权利。

 

Brinch-Pedersen, H.、Hatzack, F.
“植物生理学和全球磷管理背景下磷和磷酸化合物的分析:综述”
《当代分析化学 (Current Analytical Chemistry)》,第 2 卷第 4 期,第 421-430 页。(2006)

摘要

作为不可再生资源,磷 (P) 的管理在新千年之初受到越来越多的关注。磷酸盐作为养分的重要性、畜牧业生产密集地区的环境磷酸盐负荷以及高质量磷酸盐资源的消耗,均强调了需要对磷资源实施整体和全球管理,并对植物中磷酸化化合物的生理作用、生物合成和分解有所了解。改善磷资源管理的两条重要途径是植物的基因工程,以提高磷的生物利用率,以及应用微生物植酸酶,以提高单胃动物中植酸磷的生物利用度。本文概述了这些磷管理方法,并讨论了可用于分析 P 和 P 化合物的分析技术库。这种分析能力是开发更先进和更有效的磷资源管理方法的重要决定因素。© 2006 Bentham Science Publishers Ltd.

 

Mejlhede, N.、Kyjovska, Z.、Backes, G.、Burhenne, K.、Rasmussen, S.K.、Jahoor, A.
“EcoTILLING 用于大麦白粉病抗性基因 mlo 和 Mla 基因等位变异的鉴定”
《Plant Breeding》,第 125 卷第 5 期,第 461-467 页。(2006)

摘要

在这项研究中,描述了基于 CEL I 的突变检测技术的成功实施可发现和检测大麦基因 mlo 和 Mla 中的 DNA 多态性。这项技术被称为 EcoTILLING,这是一种高通量方法,旨在检测和发现 DNA 中新的点突变和小插入/删失。研究证明该方法不仅揭示了不同等位基因之间的多态性,还可以用作强大的遗传标记。mlo 和 Mla 基因参与了大麦防御真菌病原菌白粉病的过程。白粉病抗性基因 mlo 是单拷贝基因,而 Mla 基因座存在多个等位基因。使用 EcoTILLING 可以鉴定在所测试的 11 个 mlo 突变体的每一个中的点突变和删失。对于 Mla,对 25 个天然大麦变体进行了测试,尽管由于存在 Mla 高度相似的旁系同源物而导致鉴定很复杂,但是识别了大多数来自野生二棱大麦的近期鉴定等位基因。通过这种方法可以将野生大麦不同 Mla 等位基因与不同 mlo 等位基因组合以获得具有更持久抗性的栽培品种。© 2006 The Authors。

 

Jürgen, B.、Barken, K.B.、Tobisch, S.、Pioch, D.、Wümpelmann, M.、Hecker, M.、Schweder, T.
“应用电 DNA 芯片对枯草芽孢杆菌的生物制程相关标记基因执行表达分析”
《生物技术与生物工程 (Biotechnology and Bioengineering)》,第 92 卷第 3 期,第 299-307 页。(2005)

摘要

了解关键制程相关基因有助于改进对生物制程的控制。迄今为止,通过只能线下完成的已建立表达分析方法,可对生物制程相关标记基因进行分析。在本研究中,建议在生物制程过程中采用其他方法对基因表达执行潜在线上监控。该方法的基础是测量与基于磁珠的夹心杂交法相关的电 DNA 芯片上的特定 mRNA。为了实现对特定 mRNA 的线上测量,已开发出一种改进方法,能够快速地部分自动分离高质量 RNA 样本。对于选中的枯草芽孢杆菌的三个制程相关基因,将电 DNA 芯片的表达分析与光 DNA 微阵列和实时 RT-PCR 进行比较。我们证明,借助电 DNA 芯片执行的 mRNA 分析的结果与微阵列分析和实时 RT-PCR 技术相似。© 2005 Wiley Periodicals, Inc.

 

Ignatjev, I.、Valincius, G.、Švedaite, I.、Gaidamauskas, E.、Kažemekaite, M.、Razumas, V.、Svendsen, A.
“脂肪酶活性的直接电流测定”
《分析生物化学 (Analytical Biochemistry)》,第 344 卷第 2 期,第 275-277 页。(2005)

Valincius, G.、Ignatjev, I.、Niaura, G.、Kažemékaité, M.、Talaikyté, Z.、Razumas, V.、Svendsen, A.
“用于检测脂肪酶活性的电化学方法”
《分析化学 (Analytical Chemistry)》,第 77 卷第 8 期,第 2632-2636 页。(2005)

摘要

描述用于对脂肪酶活性执行普通检测的新型电化学技术。该方法使用固载脂肪酶底物,该底物通过在经乙硫醇自组装单层膜改性的黄金上滴注少量 9-(5′-二茂铁戊烷酰氧)壬基二硫化物 (FPONDS) 的乙醇溶液后干燥形成。FPONDS 的氧化还原二茂铁基团可生成电化学信号,信号强度与接触面上的 FPONDS 分子数量成正比。电化学和表面增强红外吸收谱数据以及使用工程失活突变体酶开展的对照实验证明,疏绵状嗜热丝孢菌中的野生型脂肪酶能够通过酶水解机理裂解 FPONDS 分子的酯键,其中包括将脂肪酶吸附到底物表面的过程。水解作用将二茂铁基团从接触面释放出来,从而触发电化学氧化还原信号的衰变。电化学信号的减弱速率与脂肪酶活性/浓度成正比。这些数据提出了用于直接测量脂肪酶活性的一般方法。© 2005 美国化学学会。

 

Mortensen, P.P.、Esbensen, K.H.
“针对微粒物质的图像分析取样,优化角度测量技术”
《化学计量学与智能实验室系统 (Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems)》,第 75 卷第 2 期,第 219-229 页。(2005)

摘要

已对工业图像分析应用进行优化,该应用使用角度测量技术 (AMT) 作为估计封装酶颗粒质量参数粉尘水平的必要部分。本研究得出的主要 AMT 结果可泛化到所有类似的微粒物质分离类型。研究的第一部分主要探讨应用角度测量技术之前的一张图像内的像素取样策略,其中展开的图像被视为一维对象。研究发现,通过对 500 多个初始点进行系统或分层取样可获得 AMT 算法的最佳参数,这些点在荧光图像中以全新的螺旋或蛇形方式展开;该全新展开过程消除了到目前为止尚不充分需要纠正的特定算法“环绕”工件。第二部分旨在划定一系列此类图像的最佳图像分析取样,即优化图像取样过程。研究发现,要对相关 QC 参数维持足够好的在线估计,所需的最少图像数量与相对较高的取样率 15-20% 相符,这与强制分析参考方法的固有测量错误级别相关。提高图像分析样本中包含的图像增量数量主要影响的是估计准确性,而对精度的影响小很多,这证明已开发的图像分析方法的稳定性令人满意,该方法目前正处于工业实施阶段。© 2004 Elsevier B.V. 保留所有权利。

 

Stocks, S.M.
“市售活性染色液 BacLight 的机理和使用”
《Cytometry Part A》,第 61 卷第 2 期,第 189-195 页。(2004)

摘要

背景:BacLight(美国俄勒冈州尤金分子探针公司)是一种备受欢迎的基于荧光的双组分染色液,可用于确定细菌细胞活性。此项工作的主要目的是全面阐明机理,并判断为什么有时会出现细胞染色液同时死活的报告。方法:使用不同组合的两种组分,碘化丙啶 (PI) 和 SYTO9,对 DNA 解决方案进行染色,并收集荧光谱。结果:KPl 和 KSYTO9 约为 3.7 x 105/M 和 1.8 x 105/M。SYTO9 的排放物更强,并与 PI 的排放物重合。观察到荧光共振能从 SYTO9 传输到 PI。即使在正常情况下,DNA 结合 SYTO9 也可能在红色区域中存在与 DNA 结合 PI 相同的组分。研究发现,当 PI 不够多,无法使核酸饱和时(>0.4 M PI 到 1 M DNA 碱基对),也会出现可能令人困惑的排放物。结论:机理是用 PI 替代 SYTO9,同时通过荧光共振能传输淬灭 SYTO9 排放物。如果没有正确考虑染色液的相对强度或者 PI 相对于核酸的浓度,可能会出现令人困惑的结果。© 2004 Wiley-Liss, Inc.

 

Hansen, E.、Mollerup, J.M.
“在离子交换色谱法中,停留对板高度的影响”
《分离科学与技术 (Separation Science and Technology)》,第 39 卷第 9 期,第 2011-2030 页。(2004)

摘要

在从弱停留到强停留的盐浓度下,在多孔介质(资源 15)和凝胶填充介质 (HyperD 20) 上确定酪氨酸(阴离子交换)和多肽抑肽酶(阳离子交换)的板高度。在恒定速度下,测量结果表明,随着停留增加,板高度升高,达到最大高度,最后随着停留增加(也就是说,当盐浓度进一步降低时)而降低。轴向扩散和质量转移可导致列中色谱峰的谱带增宽。在本文中,微粒中的质量转移速率通过三种不同的速率机制描述,分别是空隙扩散、固态扩散和平行扩散。范第姆特方程用于对数据进行建模,以确定质量转移属性。随着停留增加,板高度的发展揭示出每种速率机制的特征行为。​在空隙扩散模式中,板高度以强停留朝恒定值升高,而在固态扩散模式中,板高度降低,以强留接近恒定值。在平行扩散模式中,空隙和固态扩散均会发生。​因此,平行扩散与弱停留时的空隙扩散模式和强停留时的固态扩散模式吻合,在中间停留时达到最大,从而产生钟形曲线。该行为符合恒定速度下观察到的板高度变化。​孔隙和固态扩散模式均无法描述实验数据,但使用平行扩散模式可获得令人满意的贴合性。

 

Klenø, T.G.、Andreasen, C.M.、Kjeldal, H.Ø.、Leonardsen, L.R.、Krogh, T.N.、Neilsen, P.F.、Sørensen, M.V.、Jensen, O.N.
“胶内酶解在具备预结构样本支持的探针上的 MALDI MS 肽成像表现”
《分析化学 (Analytical Chemistry)》,第 76 卷第 13 期,第 3576-3583 页。(2004)

摘要

基质辅助激光解吸/电离(串联)质谱分析法 (MALDI MS) 广泛用于蛋白质化学和蛋白质组学研究,以辨识和描述通过聚丙烯酰胺凝胶电泳疗法分离的蛋白质。为了最大限度减少样本处理工作并提高样本产量,我们开发了一种全新的胶内酶解协议,在该协议中,直接在具备预结构样本支持的 MALDI 探针上执行样本制备。该协议包含很少的样本处理步骤,且试剂消耗量极少,因而该协议灵敏、省时且成本高效。探针上样本制备协议的表现通过分析一组从荧光染色(Cy3 和 SyproRuby)二维聚丙烯酰胺凝胶中获取的大鼠肝脏蛋白质得到证明。通过探针上胰蛋白酶解和 MALDI 肽质量成像辨识蛋白质的成功率为 89%。与标准胶内酶解协议相比,探针上胶内酶解过程可提供出色的灵敏度和肽质量成像表现。探针上酶解技术可显著提高蛋白质的氨基酸序列覆盖率,这主要归功于大 (< 1.5 kDa) 疏水肽的高效恢复和检测。这些观察结果表明,针对 MALDI MS 使用标准胶内酶解方法和样本制备技术时,有许多胰蛋白酶肽丢失。本研究也证明探针上酶解协议与 MALDI 串联质谱相结合可为蛋白组学研究提供可靠平台,包括蛋白质辨识和转换后修饰的测定。

 

Grotkjær, T.、Åkesson, M.、Christensen, B.、Gombert, A.K.、Nielsen, J.
“在 13C 标记实验中,转氨反应和蛋白质周转对标记变化的影响”
《生物技术与生物工程 (Biotechnology and Bioengineering)》,第 86 卷第 2 期,第 209-216 页。(2004)

摘要

使用一个描述酿酒酵母中央新陈代谢碳原子跃迁的动态模型来研究转氨反应和蛋白质周转对 13C 标记恒化器实验瞬时行为的影响。执行的模拟表明,转氨作用和蛋白质周转产生的碳交换可显著增加 TCA 循环中代谢物达到同位素稳定状态所需的时间,这与已发表的实验观察结果相符。​另一方面,转氨作用和蛋白质周转可加快将已标记碳结合到一些游离和蛋白质结合氨基酸的净速率。模拟结果表明,经过三次停留后,将已标记碳​结合到从生物质水解液中获取的氨基酸的模式与普遍认为的一级动力学行为存在显著差异。这些观察结果表明应该更加谨慎,同时指向 13C 标记实验设计和解读的新机会。© 2004 Wiley Periodicals, Inc.

 

Navrátil, M.、Cimander, C.、Mandenius, C.-F.
“对生产规模酸奶和 Filmjölk 发酵的在线多传感器监控”
《农业化学与食品化学杂志 (Journal of Agricultural and Food Chemistry)》,第 52 卷第 3 期,第 415-420 页。(2004)

摘要

近红外 (NIR) 光谱和电子鼻 (EN) 数据用于在工业条件下对酸奶和 filmjölk(瑞典的一种类似酸奶的酸牛奶)进行在线监控。NIR 和 EN 信号通过对主成分分析加载向量进行评估加以选择,并通过研究所选主成分的可变性进行深入分析。NIR 和 EN 信号的前几个主成分用于在线生成工艺轨迹图,以显示发酵的实际状况。NIR 信号也用于建立实证偏最小二乘 (PLS) 模型,以预测培养菌的 pH 值和可滴定酸度(表示为吉尔涅尔度,oT)。通过使用 5 或 6 个 PLS 因子,模型产生可接受的预测结果,通过增加可靠且精确的校准数据的数量,可进一步改善预测结果。呈现的结果表明,融合 NIR 和 EN 信号有可能实现对酸奶发酵工艺质量的快速在线监控和评估。

 

Gabig-Ciminska, M.、Holmgren, A.、Andresen, H.、Bundvig Barken, K.、Wümpelmann, M.、Albers, J.、Hintsche, R.、Breitenstein, A.、Neubauer, P.、Los, M.、Czyz, A.、Wegrzyn, G.、Silfversparre, G.、Jürgen, B.、Schweder, T.、Enfors, S.-O.
“电芯片用于快速检测和量化核酸”
《生物传感器与生物电子学 (Biosensors and Bioelectronics)》,第 19 卷第 6 期,第 537-546 页。(2004)

摘要

提供与基于磁珠的夹心杂交 (BBSH) 耦合的基于硅片的电导探头,作为对特定核酸执行快速分析的方法。结合顺磁珠和固定捕获探针的微流体平台用于生物识别步骤。该协议涉及单链核酸目标与磁珠上的捕获探针和反应溶液中的检测探针的同步夹心杂交,然后是检测探针的酶标记,酶促反应,最后是芯片表面的酶产物电位测量。抗 DIG 碱性磷酸酶共轭用于 DIG 标记检测探针的酶标记。磷酸对氨基苯酚 (pAPP) 用作底物。酶促反应产物对氨基苯酚 (pAP) 在芯片的阳极被氧化成醌亚胺,醌亚胺又在阴极还原回 pAP。这些化合物的循环氧化还原导致电流产生可能与分析物浓度相关的特征信号。试验中不同步骤的表现均使用体外合成的 RNA 寡核苷酸进行表征,然后使用仪器在大肠杆菌提取物中分析 16S rRNA。试验时间取决于所需灵敏度。​数量从 1011 到 1010 个分子不等的人工 RNA 目标和 16S rRNA 的试验时间分别为 25 分钟和 4 小时以内。© 2003 Elsevier B.V. 保留所有权利。

 

Barken, K.B.、Gabig-Ciminska, M.、Holmgren, A.、Molin, S.
“未标记辅助探针对通过基于磁珠的夹心杂交法检测 RNA 目标的影响”
《BioTechniques》,第 36 卷第 1 期,第 124-132 页。(2004)

摘要

对协助执行基于磁珠的夹心杂交试验的未标记辅助寡核苷酸进行测试,以实现捕获和检测探针的优化配置。所用目标是全长体外合成的 mRNA 分子。研究发现,用于补充 5′ 末端相连捕获探针结合部位相邻区域的辅助探针比以检测探针结合部位相邻位置为目标的辅助探针更有效。该区别被认为是由于捕获探针结合(从而减少磁珠的结构干扰)区域的 RNA 二级结构破坏而引起的。使用其他辅助探针后,​显示出累加效应。通过在捕获和检测探针两侧使用辅助探针​,杂交效率提高 15 至 40 倍(具体取决于目标),从而提高杂交试验的灵敏度。使用与检测探针关联的电芯片来检测通过碱性磷酸酶产生的对氨基苯酚,在不使用核酸扩增步骤的情况下达到 2 个 10-13 M mRNA 分子的检测极限。