Basketter, D.、Berg, N.、Broekhuizen, C.、Fieldsend, M.、Kirkwood, S.、Kluin, C.、Mathieu, S.、Rodriguez, C. 
“清洁产品中的酶:毒理学性质和风险评估/管理概述”
《管制毒理学与药理学 (Reg. Toxicol.Pharmacol)》,第 64 卷第 1 期,第 117-123 页。(2012)

摘要

用于清洁产品的酶具有极好的安全特征,几乎不会对人体造成不良反应。酶的急性毒性、遗传毒性、亚急性和重复剂量毒性并不显著。生殖毒性和致癌性也不是关注的终点。例外情况是一些蛋白酶在高浓度下产生刺激作用的能力,以及这些细菌/真菌蛋白质作为呼吸敏化剂的内在可能性,后者更为重要。可以合理假设大多数酶蛋白具有这种危害。然而,缺乏进一步表征各种酶的呼吸致敏危害的方法,而且用于风险评估和管理的信息虽然充分,但是仍有限。以前的大部分信息是在动物模型和评估免疫交叉反应性的体外免疫测定中产生的。尽管如此,通过对空气中的暴露量施加严格限制(根据限定的最小有作用限值 60 ng 活性酶蛋白/m3)以及空气和健康监测,可确保职业安全。同样,通过确保空气暴露保持同样较低的水平,加上对这些酶对皮肤和织物的作用的了解,已经证明有可能建立消费者安全使用含酶产品的悠久历史。© 2012 Elsevier Inc. 保留所有权利。

 

Basketter, D.、Berg, N.、Kruszewski, F.、Sarlo, K.、Concoby, B. 
“洗涤剂行业对职业性过敏和哮喘的致敏作用相关性” 
《免疫毒理学期刊 (J. Immunotox.)》第 9 卷第 3 期,第 314-319 页。(2012)

摘要

在各种洗涤剂产品中使用的细菌和真菌来源的工业酶中,暴露与诱导致敏作用和引发呼吸症状之间的关系存在相当多的历史经验。尤其是洗涤剂行业在如何通过控制暴露限制具有低风险症状的致敏作用方面具有丰富的经验。但是,经验也表明,即使潜在的职业过敏问题得到稳定控制,也存在较大的知识缺口,而且暴露与致敏作用之间的关系难以确立。后一方面涉及对一段时间内高水平暴露和低水平暴露如何促成致敏作用的认识不足。此外,虽然少数工人产生特异性 IgE,但基本上没有任何症状,似乎与过敏法则相矛盾,即一旦发生过敏,个体会对低得多的暴露水平作出反应。对于酶,症状表现发生在与引起诱导的相似水平或更高水平下。尽管存在一些知识方面的缺口,医学监督计划和持续空气监测为成功管理职业环境中的酶提供了工具。最终,从职业环境中获得的知识有助于完成消费者暴露于洗涤剂酶的安全评估。数十年来在职业上和消费者产品中的安全使用已经证明这种评估是正确的。© 2012 Informa Healthcare。保留所有权利。

 

Basketter, D.、Berg, N.、Kruszewski, F.、Sarlo, K.、Concoby, B. 
“洗涤剂酶的毒理学和免疫学”
《免疫毒理学期刊 (J. Immunotox)》第 9 卷第 3 期,第 320-326 页。(2012)

摘要

洗涤剂酶具有非常好的安全特征,几乎没有能力在人体内产生不利的急性或慢性反应。例外情况是一些蛋白酶在高浓度下产生刺激作用的能力有限,以及这些细菌和真菌蛋白质作为呼吸敏化剂的内在可能性,这在 20 世纪 60 年代和 20 世纪 70 年代使用工业酶的早期阶段在人体内得到了证明。酶如何产生这些反应开始变得更加明确一些,人们对细胞表面机制形成了认识,即酶活性促进了 T 辅助细胞 (TH)-2 细胞反应,导致了 IgE 产生。可以合理假设大多数酶蛋白具有这种内在危害。然而,进一步表征各种酶的呼吸致敏危害的毒理学方法仍然是一个有问题的领域,导致用于风险评估/管理的信息虽然充分,但是有限。其中大部分信息是过去在动物模型和评估免疫交叉反应性的体外免疫测定中产生的。最后,通过更全面地了解驱动酶引起 IgE 反应的机制,就有可能开发更好的危害表征方法,从而进行风险评估和管理。© 2012 Informa Healthcare。保留所有权利。

 

Basketter, D.A.、Broekhuizen, C.、Fieldsend, M.、Kirkwood, S.、Mascarenhas, R.、Maurer, K.、Pedersen, C.、Rodriguez, C.、Schiff, H.-E.
“根据 REACH 法规定义酶蛋白呼吸道过敏原的职业和消费者暴露限值”
《毒理学 (Toxicology)》,第 268 期,第 165-170 页。(2010)

摘要

研究认为许多物质对皮肤和/或呼吸道有致敏作用。其中许多物质是有用的材料,因此为了确保它们可以安全使用,有必要描述危害的特征并确定适当的暴露极限。新的欧盟法规 (REACH) 要求定义一个无效衍生水平 (DNEL)。在无法确定 DNEL 的情况下,例如,对于敏化物质,则建议衍生的最小作用水平(DMEL)。对于广泛用于工业和消费品领域的细菌和真菌酶,同时也是众所周知的呼吸致敏物质,可以通过对职业和消费者经验进行全面的回顾性审查来确定 DMEL。特别是,将验证的员工医疗监督数据与长期生成的暴露记录进行对比,对职业 DMEL 的信息收集来说至关重要。这一经验表明,纯酶蛋白长期适用的 60 ng/m3 限值已经成为洗涤剂行业中致敏性职业健康限值定义的成功起点。对此应用调节因子具有有限的致敏诱导作用,避免了用已知酶引发症状的任何有意义的风险,并且为其效力尚未完全表征的新酶提供了适当的安全水平。例如,在洗涤剂行业,这导致通常使用的职业暴露限值比 60 ng/m3 的起点低 3–10 倍。相比之下,消费者的暴露限值不同,因为暴露类型本身覆盖范围很广。显示使用安全的最高水平 15 ng/m3 与洗衣机触发喷雾相关,但是低得多的水平(例如 0.01 ng/m3)通常与其他类型的安全暴露相关。消费者限值通常介于这些数值,并取决于与产品使用相关的实际暴露。© 2009 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Vinken, M.、Doktorova, T.、Ellinger-Ziegelbauer, H.、Ahr, H.-J.、Lock, E.、Carmichael, P.、Roggen, E.、van Delft, J.、Kleinjans, J.、Castell, J.、Bort, R.、Donato, T.、Ryan, M.、Corvi, R.、Keun, H.、Ebbels, T.、Athersuch, T.、Sansone, S.-A.、Rocca-Serra, P.、Stierum, R.、Jennings, P.、Pfaller, W.、Gmuender, H.、Vanhaecke, T.、Rogiers, V.
“carcinoGENOMICS 项目:模型化合物的关键选择,以开展基于组学的体外致癌性筛选试验”
《突变研究-突变研究综述 (Mutation Research-Reviews in Mutation Research)》,​在编文章。(2008)

摘要​

近期,有关化学物质的欧洲立法已修改,迫使科学界加快寻找可部分或完全取代动物实验的替代方法。第六个框架计划项目 carcinoGENOMICS 旨在开展基于组学的体外筛选,从而在泛欧洲环境下检测化合物的致癌风险。本文深入分析了为创建和微调体外致癌性试验选择适当参考化合物的复杂性。首先,定义了一些具体的模型化合物选择标准。其次,描述了需要遵循的策略,包括可参考的资源,并简要说明了所选化合物。 最后,讨论了在选择过程中遇到的限制因素和问题。选择一组合适的化学物质在类似研究项目的早期阶段是常见障碍,因此本文提供的信息可能很有价值。© 2008.

 

Devin, M.、Mortellaro, S.
“满足无动物来源培养需求”
《制造化学师协会 (Manufacturing Chemist)》,第 79 卷第 3 期,第 27-28 页。(2008)

Larsen, A.I.、Johnsen, C.R.、Frickmann, J.、Mikkelsen, S.
“酶生产工厂内员工的呼吸敏化和过敏发病率及其与暴露量和宿主因子的关系”
《职业与环境医学 (Occupational and Environmental Medicine)》,第 64 卷第 11 期,第 763-768 页。(2007)

摘要

目标:微生物酶属于高分子量呼吸敏化剂,报告称,已知微生物酶会引起职业性过敏,通常表现为鼻炎和/或哮喘。与少量暴露相比,大量暴露于此类高分子量敏化剂,或当暴露量达到峰值时,蕴含的风险将更大,但暴露量、敏化和临床过敏之间的确切关系尚未明确。作者试图预估酶生产工厂内发生呼吸酶过敏的风险,并评估暴露指数与过敏之间的关系。方法:以 1970 年开始收集的卫生监测数据为基础,开展回顾性跟进研究。包括来自生产线和实验室的 1207 名员工。根据阈值限值的 10 倍增量/减量及其他暴露信息,以回顾性的方式将相关部门的酶暴露水平大致分为五个暴露水平。使用最大似然估计法,以时间作为次周期,在与恒定强度拟合的指数回归生存模型中预估风险。结果:在员工受雇的前三年,酶敏化和过敏的人年发病率分别为 0.13 和 0.03。在拟合模型中,暴露等级与结果变量无关联。​在三十年里,敏化风险逐渐降低,而过敏的风险保持不变。​在吸烟人群中,敏化和过敏风险加倍。就业前特异反应仅与敏化风险相关。结论:在研究期间,酶敏化风险逐渐降低,这可能反映了工作环境的改善。对于酶过敏,无法证明存在类似的降低。两个结果与暴露量预估均无关,原因可能是预估精度较低。

 

Rovida, C.、Basketter, D.、Casati, S.、De Silva, O.、Hermans, H.、Kimber, I.、Manou, I.、Weltzien, H.U.、Roggen, E.
“管理综合项目 (Sens-it-iv),以开展敏化评估体外试验”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 3 期,第 317-322 页。(2007)

摘要

Sens-it-iv 是一个综合项目,由欧盟委员会框架计划 6 提供资金支持,该项目的总目标是为化学、化妆品和制药行业制定体外试验和试验策略,以评估潜在接触和呼吸敏化剂的风险。此类试验被正式验证和接纳后,可对现有和新化学实体及欧洲工业产品的敏化可能性进行评估,以便根据有关化学物质的新欧盟 REACH 法规进行分类和贴标,或者根据欧盟化妆品指令第 7 次修正案进行风险评估。Sens-it-iv 涉及代表行业、高校和监管机构的 28 个合作伙伴,其中包括欧盟成员国的各家机构和具备不同职能的组织,他们的共同目标是实现最终可交付成果 — 提高消费性产品的安全性,同时减少动物实验。本文概述了项目结构,并详细描述了其管理组织。

 

Mortellaro, S.、Devine, M.
“无动物来源生物制药的进展”
《国际生物制药 (BioPharm International)》,第 20 卷第 5 期附刊,第 30-37 页。(2007)

Kimber, I.、Agius, R.、Basketter, D.A.、Corsini, E.、Cullinan, P.、Dearman, R.J.、Gimenez-Arnau, E.、Greenwell, L.、Hartung, T.、Kuper, F.、Maestrelli, P.、Roggen, E.、Rovida, C.、Casati, S.
“化学呼吸过敏:危险源辨识和特征描述的机会”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 2 期,第 243-265 页。(2007)

Basketter, D.、Pease, C.、Kasting, G.、Kimber, I.、Casati, S.、Cronin, M.、Diembeck, W.、Gerberick, F.、Hadgraft, J.、Hartung, T.、Marty, J.P.、Nikolaidis, E.、Patlewicz, G.、Roberts, D.、Roggen, E.、Rovida, C.、Van De Sandt, J.
“皮肤敏化和表皮处置:敏化危险源辨识表皮处置与风险评估的相关性:ECVAM 研讨会 59a 的报告和建议”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 1 期,第 137-154 页。(2007)

Roggen, E.L.、Soni, N.K.、Verheyen, G.R.
“呼吸系统免疫毒性:体外评估”
《体外毒理学 (Toxicology in Vitro)》,第 20 卷第 8 期,第 1249-1264 页。(2006)

摘要

到目前为止,仍无法在体外评估呼吸系统制剂的免疫毒性效力。末端和呼吸道的复杂性、文献完备的呼吸系统制剂的有限可用性是主要原因。化合物触发上皮细胞 (EC) 表达体外表面蛋白质和可溶性介质的证据刺激了其在开展呼吸系统免疫毒性试验中的使用。已对多种气道 EC 和 EC 系进行评估,但可用信息似乎表明人肺泡细胞(例如,A549)为最适宜的细胞类型。各种复杂程度的基于 EC 的试验形式已被评估。到目前为止,使用人 A549 肺细胞系的 3D 模型提供了良好结果。已对树突细胞 (DC) 开展深入研究。然而,目前可用的试验不适合辨别敏化剂的效力。可能的解释包括 DC 的生成缺少标准化协议、没有良好标准用于预估体外衍生 DC 培养的质量、目前所用末端的动力有限。到目前为止,对肺泡巨噬细胞 (AM) 的关注较少。这可能有点不合理,因为巨噬细胞可结合先天性免疫应答与适应性免疫。我们观察到 EC、DC 和 AM 相互影响,这表示如果希望根据敏化效力排列化合物, 试验形式至少需要结合其中两种细胞类型。此外,化合物穿过细胞膜的能力是免疫毒性化合物的重要特性,只能在 3D 重组人体组织模型中进行评估。虽然报告显示皮肤的数据大有用处,但具有免疫活性的 3D 重组人肺仍需要评估其呼吸系统免疫毒性。显然,任何这些​简化试验(与免疫应答的复杂性相比)的成功均高度依赖于早期生物标记(在粘膜屏障级别表达)的可用性,这些生物标记对发生在免疫应答下游的相关免疫毒性机制具有预测作用。此类生物标记尚不可用。© 2006 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Bindslev-Jensen, C.、Skov, P.S.、Roggen, E.L.、Hvass, P.、Brinch, D.S.
“研究食品行业使用的 19 种不同市售酶的潜在过敏性”
《食品与化学毒理学 (Food and Chemical Toxicology)》,第 44 卷第 11 期,第 1909-1915 页。(2006)

摘要

本研究旨在调查食品行业使用的 19 种已获有关机构批准的市售酶对易过敏患者的安全性。包括通过转基因生物生产的酶。包括经诊断对吸入过敏原、食品过敏原、蜜蜂或黄蜂过敏的连续四百名成人患者。在上述过敏原的皮肤点刺试验中,所有患者至少对其中一种过敏原呈阳性。在患者前臂执行了 19 种酶的皮肤点刺试验,如果呈阳性(13 名患者),则从血嗜碱粒细胞执行体外组胺释放。随后,使用进一步纯化的酶对皮肤点刺试验结果呈阳性的患者进行重新研究,最终按照双盲安慰剂对照协议,通过口服酶的方式进行研究。​只看到一例对安慰剂挑战有反应。在一些实例中,看到因酶引起的阳性皮肤点刺试验结果或阳性组胺释放,但由于在使用加大剂量酶(与正常每日摄入量相比)的后续口服挑战中,没有患者对任何市售酶呈阳性,因此发现结果没有临床相关性。研究包括大量广泛的酶类别和起源。由于引起过敏的发现结果没有临床相关性,因此我们推断,关于食品过敏,一般不需要担心食品酶的摄取。© 2006 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Mittag, D.、Batori, V.、Neudecker, P.、Wiche, R.、Friis, E.P.、Ballmer-Weber, B.K.、Vieths, S.、Roggen, E.L.
“在个体患者中研究 Bet v 1 和同源食品过敏原中的特异性和交叉反应性 IgE 表位的新方法”
《分子免疫学 (Molecular Immunology)》,第 43 卷第 3 期,第 268-278 页。(2006)

摘要

背景:具有临床相关性的过敏反应需要 IgE 在过敏原表面识别至少两种不同的表位。​这些表位可能是特异性表位,或交叉反应性表位。​而且,IgE 反应性的模式可能因患者而异。​本研究旨在比较个体患者之间的特异性和交叉反应性 IgE 表位与表位模式。我们使用​ Bet v 1 相关食品过敏作为模型。方法:通过交叉竞争 ELISA 法,针对 Bet v 1 及其同源化合物 Gly m 4(大豆)、Ara h 8(花生)和 Pru av 1(樱桃)中的特异性和交叉反应性 IgE,对五名患者进行了研究。使用来自个体血清的多克隆纯化 IgE,通过噬菌体展示随机 7 肽库的竞争免疫筛选,评估过敏原特异性和交叉反应性 IgE 表位。产生的肽模拟物使用基于计算机的算法映射在过敏原的 3D 结构表面。结果:竞争免疫筛选和肽映射确定了特定于患者的 IgE 表位模式。然而,所有四个蛋白质上均确定了由所有患者认可的一个 IgE 结合表面区域和由三名患者认可的两个区域。通过交叉竞争 ELISA 法,根据四种重组过敏原确定个体患者血清 IgE 交叉反应性的结果与这些结果相符。结论:选择噬菌体展示肽模拟物与来自过敏患者的血清 IgE,并通过基于计算机的方法将肽模拟物映射到三维过敏原结构表面,该前景光明的新工具可用于研究个体患者中的 IgE 表位特异性。有关表位结构的此类基本信息可用于预测新食品的交叉反应性和潜在过敏性。© 2005 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Batori, V.、Friis, E.P.、Nielsen, H.、Roggen, E.L.
“在结构环境中使用表位主题数据库预测抗原决定簇在蛋白质中位置的计算机方法”
《 分子识别杂志 (Journal of Molecular Recognition)》,第 19 卷第 1 期,第 21-29 页。(2006)

摘要​

目前,对蛋白质抗体复合物进行 X 射线晶体分析仍是最直接的 B 细胞表位识别方法。本研究的目的是在不需要详细信息的众多应用领域,例如开发药物蛋白、疫苗和工业酶,使用抗原氨基酸主题作为快速替代方法,以评估基于计算机的表位映射工具 (EMT) 的潜力。EMT 使用 Gal d 4 作为模型蛋白质,能够在折叠蛋白质的环境中识别已知参与抗体结合的氨基酸位置。EMT 的高敏感度和阳性预测值以及 EMT 建议的结构组合相关性表明,存在可能参与抗原决定簇的氨基酸主题。此外,微分映射显示,敏感度和阳性预测值取决于映射中所包含氨基酸的最小相对表面可接触性 (RSA),这证明 EMT 符合以下事实:表位是具有不同可接触程度的三维实体。与现有预测标度的对比表明,在物理-化学标度方面,EMT 更有优势。该映射工具的表现也比可用的结构标度更好,但差异的重要性仍有待确认。因此,如果不需要详细的表位信息,EMT 这种快速简单的方法可能会替代 X 射线晶体分析,以用于预测结构抗原决定簇。版权所有 © 2005 John Wiley & Sons, Ltd.

 

Basketter, D.、Berg, N.、Broekhuizen, C.、Fieldsend, M.、Kirkwood, S.、Kluin, C.、Mathieu, S.、Rodriguez, C. 
“清洁产品中的酶:毒理学性质和风险评估/管理概述”
《管制毒理学与药理学 (Reg. Toxicol.Pharmacol)》,第 64 卷第 1 期,第 117-123 页。(2012)

摘要

用于清洁产品的酶具有极好的安全特征,几乎不会对人体造成不良反应。酶的急性毒性、遗传毒性、亚急性和重复剂量毒性并不显著。生殖毒性和致癌性也不是关注的终点。例外情况是一些蛋白酶在高浓度下产生刺激作用的能力,以及这些细菌/真菌蛋白质作为呼吸敏化剂的内在可能性,后者更为重要。可以合理假设大多数酶蛋白具有这种危害。然而,缺乏进一步表征各种酶的呼吸致敏危害的方法,而且用于风险评估和管理的信息虽然充分,但是仍有限。以前的大部分信息是在动物模型和评估免疫交叉反应性的体外免疫测定中产生的。尽管如此,通过对空气中的暴露量施加严格限制(根据限定的最小有作用限值 60 ng 活性酶蛋白/m3)以及空气和健康监测,可确保职业安全。同样,通过确保空气暴露保持同样较低的水平,加上对这些酶对皮肤和织物的作用的了解,已经证明有可能建立消费者安全使用含酶产品的悠久历史。© 2012 Elsevier Inc. 保留所有权利。

 

Basketter, D.、Berg, N.、Kruszewski, F.、Sarlo, K.、Concoby, B. 
“洗涤剂行业对职业性过敏和哮喘的致敏作用相关性” 
《免疫毒理学期刊 (J. Immunotox.)》第 9 卷第 3 期,第 314-319 页。(2012)

摘要

在各种洗涤剂产品中使用的细菌和真菌来源的工业酶中,暴露与诱导致敏作用和引发呼吸症状之间的关系存在相当多的历史经验。尤其是洗涤剂行业在如何通过控制暴露限制具有低风险症状的致敏作用方面具有丰富的经验。但是,经验也表明,即使潜在的职业过敏问题得到稳定控制,也存在较大的知识缺口,而且暴露与致敏作用之间的关系难以确立。后一方面涉及对一段时间内高水平暴露和低水平暴露如何促成致敏作用的认识不足。此外,虽然少数工人产生特异性 IgE,但基本上没有任何症状,似乎与过敏法则相矛盾,即一旦发生过敏,个体会对低得多的暴露水平作出反应。对于酶,症状表现发生在与引起诱导的相似水平或更高水平下。尽管存在一些知识方面的缺口,医学监督计划和持续空气监测为成功管理职业环境中的酶提供了工具。最终,从职业环境中获得的知识有助于完成消费者暴露于洗涤剂酶的安全评估。数十年来在职业上和消费者产品中的安全使用已经证明这种评估是正确的。© 2012 Informa Healthcare。保留所有权利。

 

Basketter, D.、Berg, N.、Kruszewski, F.、Sarlo, K.、Concoby, B. 
“洗涤剂酶的毒理学和免疫学”
《免疫毒理学期刊 (J. Immunotox)》第 9 卷第 3 期,第 320-326 页。(2012)

摘要

洗涤剂酶具有非常好的安全特征,几乎没有能力在人体内产生不利的急性或慢性反应。例外情况是一些蛋白酶在高浓度下产生刺激作用的能力有限,以及这些细菌和真菌蛋白质作为呼吸敏化剂的内在可能性,这在 20 世纪 60 年代和 20 世纪 70 年代使用工业酶的早期阶段在人体内得到了证明。酶如何产生这些反应开始变得更加明确一些,人们对细胞表面机制形成了认识,即酶活性促进了 T 辅助细胞 (TH)-2 细胞反应,导致了 IgE 产生。可以合理假设大多数酶蛋白具有这种内在危害。然而,进一步表征各种酶的呼吸致敏危害的毒理学方法仍然是一个有问题的领域,导致用于风险评估/管理的信息虽然充分,但是有限。其中大部分信息是过去在动物模型和评估免疫交叉反应性的体外免疫测定中产生的。最后,通过更全面地了解驱动酶引起 IgE 反应的机制,就有可能开发更好的危害表征方法,从而进行风险评估和管理。© 2012 Informa Healthcare。保留所有权利。

Basketter, D.A.、Broekhuizen, C.、Fieldsend, M.、Kirkwood, S.、Mascarenhas, R.、Maurer, K.、Pedersen, C.、Rodriguez, C.、Schiff, H.-E.
“根据 REACH 法规定义酶蛋白呼吸道过敏原的职业和消费者暴露限值”
《毒理学 (Toxicology)》,第 268 期,第 165-170 页。(2010)


摘要

研究认为许多物质对皮肤和/或呼吸道有致敏作用。其中许多物质是有用的材料,因此为了确保它们可以安全使用,有必要描述危害的特征并确定适当的暴露极限。新的欧盟法规 (REACH) 要求定义一个无效衍生水平 (DNEL)。在无法确定 DNEL 的情况下,例如,对于敏化物质,则建议衍生的最小作用水平 (DMEL)。对于广泛用于工业和消费品领域的细菌和真菌酶,同时也是众所周知的呼吸致敏物质,可以通过对职业和消费者经验进行全面的回顾性审查来确定 DMEL。特别是,将验证的员工医疗监督数据与长期生成的暴露记录进行对比,对职业 DMEL 的信息收集来说至关重要。这一经验表明,纯酶蛋白长期适用的 60 ng/m3 限值已经成为洗涤剂行业中致敏性职业健康限值定义的成功起点。对此应用调节因子具有有限的致敏诱导作用,避免了用已知酶引发症状的任何有意义的风险,并且为其效力尚未完全表征的新酶提供了适当的安全水平。例如,在洗涤剂行业,这导致通常使用的职业暴露限值比 60 ng/m3 的起点低 3–10 倍。相比之下,消费者的暴露限值不同,因为
暴露类型本身覆盖范围很广。显示使用安全的最高水平 15 ng/m3 与洗衣机触发喷雾相关,但是低得多的水平(例如 0.01 ng/m3)通常与其他类型的安全暴露相关。
消费者限值通常介于这些数值,并取决于与产品使用相关的实际暴露。© 2009 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Vinken, M.、Doktorova, T.、Ellinger-Ziegelbauer, H.、Ahr, H.-J.、Lock, E.、Carmichael, P.、Roggen, E.、van Delft, J.、Kleinjans, J.、Castell, J.、Bort, R.、Donato, T.、Ryan, M.、Corvi, R.、Keun, H.、Ebbels, T.、Athersuch, T.、Sansone, S.-A.、Rocca-Serra, P.、Stierum, R.、Jennings, P.、Pfaller, W.、Gmuender, H.、Vanhaecke, T.、Rogiers, V.
“carcinoGENOMICS 项目:模型化合物的关键选择,以开展基于组学的体外致癌性筛选试验”
《突变研究-突变研究综述 (Mutation Research-Reviews in Mutation Research)》,​在编文章。(2008)

摘要​

近期,有关化学物质的欧洲立法已修改,迫使科学界加快寻找可部分或完全取代动物实验的替代方法。第六个框架计划项目 carcinoGENOMICS 旨在开展基于组学的体外筛选,从而在泛欧洲环境下检测化合物的致癌风险。本文深入分析了为创建和微调体外致癌性试验选择适当参考化合物的复杂性。首先,定义了一些具体的模型化合物选择标准。其次,描述了需要遵循的策略,包括可参考的资源,并简要说明了所选化合物。 最后,讨论了在选择过程中遇到的限制因素和问题。选择一组合适的化学物质在类似研究项目的早期阶段是常见障碍,因此本文提供的信息可能很有价值。© 2008.

 

Devin, M.、Mortellaro, S.
“满足无动物来源培养需求”
《制造化学师协会 (Manufacturing Chemist)》,第 79 卷第 3 期,第 27-28 页。(2008)

Larsen, A.I.、Johnsen, C.R.、Frickmann, J.、Mikkelsen, S.
“酶生产工厂内员工的呼吸敏化和过敏发病率及其与暴露量和宿主因子的关系”
《职业与环境医学 (Occupational and Environmental Medicine)》,第 64 卷第 11 期,第 763-768 页。(2007)

摘要

目标:微生物酶属于高分子量呼吸敏化剂,报告称,已知微生物酶会引起职业性过敏,通常表现为鼻炎和/或哮喘。与少量暴露相比,大量暴露于此类高分子量敏化剂,或当暴露量达到峰值时,蕴含的风险将更大,但暴露量、敏化和临床过敏之间的确切关系尚未明确。作者试图预估酶生产工厂内发生呼吸酶过敏的风险,并评估暴露指数与过敏之间的关系。方法:以 1970 年开始收集的卫生监测数据为基础,开展回顾性跟进研究。包括来自生产线和实验室的 1207 名员工。根据阈值限值的 10 倍增量/减量及其他暴露信息,以回顾性的方式将相关部门的酶暴露水平大致分为五个暴露水平。使用最大似然估计法,以时间作为次周期,在与恒定强度拟合的指数回归生存模型中预估风险。结果:在员工受雇的前三年,酶敏化和过敏的人年发病率分别为 0.13 和 0.03。在拟合模型中,暴露等级与结果变量无关联。​在三十年里,敏化风险逐渐降低,而过敏的风险保持不变。​在吸烟人群中,敏化和过敏风险加倍。就业前特异反应仅与敏化风险相关。结论:在研究期间,酶敏化风险逐渐降低,这可能反映了工作环境的改善。对于酶过敏,无法证明存在类似的降低。两个结果与暴露量预估均无关,原因可能是预估精度较低。

 

Rovida, C.、Basketter, D.、Casati, S.、De Silva, O.、Hermans, H.、Kimber, I.、Manou, I.、Weltzien, H.U.、Roggen, E.
“管理综合项目 (Sens-it-iv),以开展敏化评估体外试验”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 3 期,第 317-322 页。(2007)

摘要

Sens-it-iv 是一个综合项目,由欧盟委员会框架计划 6 提供资金支持,该项目的总目标是为化学、化妆品和制药行业制定体外试验和试验策略,以评估潜在接触和呼吸敏化剂的风险。此类试验被正式验证和接纳后,可对现有和新化学实体及欧洲工业产品的敏化可能性进行评估,以便根据有关化学物质的新欧盟 REACH 法规进行分类和贴标,或者根据欧盟化妆品指令第 7 次修正案进行风险评估。Sens-it-iv 涉及代表行业、高校和监管机构的 28 个合作伙伴,其中包括欧盟成员国的各家机构和具备不同职能的组织,他们的共同目标是实现最终可交付成果 — 提高消费性产品的安全性,同时减少动物实验。本文概述了项目结构,并详细描述了其管理组织。

 

Mortellaro, S.、Devine, M.
“无动物来源生物制药的进展”
《国际生物制药 (BioPharm International)》,第 20 卷第 5 期附刊,第 30-37 页。(2007)

Kimber, I.、Agius, R.、Basketter, D.A.、Corsini, E.、Cullinan, P.、Dearman, R.J.、Gimenez-Arnau, E.、Greenwell, L.、Hartung, T.、Kuper, F.、Maestrelli, P.、Roggen, E.、Rovida, C.、Casati, S.
“化学呼吸过敏:危险源辨识和特征描述的机会”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 2 期,第 243-265 页。(2007)

Basketter, D.、Pease, C.、Kasting, G.、Kimber, I.、Casati, S.、Cronin, M.、Diembeck, W.、Gerberick, F.、Hadgraft, J.、Hartung, T.、Marty, J.P.、Nikolaidis, E.、Patlewicz, G.、Roberts, D.、Roggen, E.、Rovida, C.、Van De Sandt, J.
“皮肤敏化和表皮处置:敏化危险源辨识表皮处置与风险评估的相关性:ECVAM 研讨会 59a 的报告和建议”
《实验动物替代 (ATLA Alternatives to Laboratory Animals)》,第 35 卷第 1 期,第 137-154 页。(2007)

Roggen, E.L.、Soni, N.K.、Verheyen, G.R.
“呼吸系统免疫毒性:体外评估”
《体外毒理学 (Toxicology in Vitro)》,第 20 卷第 8 期,第 1249-1264 页。(2006)

摘要

到目前为止,仍无法在体外评估呼吸系统制剂的免疫毒性效力。末端和呼吸道的复杂性、文献完备的呼吸系统制剂的有限可用性是主要原因。化合物触发上皮细胞 (EC) 表达体外表面蛋白质和可溶性介质的证据刺激了其在开展呼吸系统免疫毒性试验中的使用。已对多种气道 EC 和 EC 系进行评估,但可用信息似乎表明人肺泡细胞(例如,A549)为最适宜的细胞类型。各种复杂程度的基于 EC 的试验形式已被评估。到目前为止,使用人 A549 肺细胞系的 3D 模型提供了良好结果。已对树突细胞 (DC) 开展深入研究。然而,目前可用的试验不适合辨别敏化剂的效力。可能的解释包括 DC 的生成缺少标准化协议、没有良好标准用于预估体外衍生 DC 培养的质量、目前所用末端的动力有限。到目前为止,对肺泡巨噬细胞 (AM) 的关注较少。这可能有点不合理,因为巨噬细胞可结合先天性免疫应答与适应性免疫。我们观察到 EC、DC 和 AM 相互影响,这表示如果希望根据敏化效力排列化合物, 试验形式至少需要结合其中两种细胞类型。此外,化合物穿过细胞膜的能力是免疫毒性化合物的重要特性,只能在 3D 重组人体组织模型中进行评估。虽然报告显示皮肤的数据大有用处,但具有免疫活性的 3D 重组人肺仍需要评估其呼吸系统免疫毒性。显然,任何这些​简化试验(与免疫应答的复杂性相比)的成功均高度依赖于早期生物标记(在粘膜屏障级别表达)的可用性,这些生物标记对发生在免疫应答下游的相关免疫毒性机制具有预测作用。此类生物标记尚不可用。© 2006 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Bindslev-Jensen, C.、Skov, P.S.、Roggen, E.L.、Hvass, P.、Brinch, D.S.
“研究食品行业使用的 19 种不同市售酶的潜在过敏性”
《食品与化学毒理学 (Food and Chemical Toxicology)》,第 44 卷第 11 期,第 1909-1915 页。(2006)

摘要

本研究旨在调查食品行业使用的 19 种已获有关机构批准的市售酶对易过敏患者的安全性。包括通过转基因生物生产的酶。包括经诊断对吸入过敏原、食品过敏原、蜜蜂或黄蜂过敏的连续四百名成人患者。在上述过敏原的皮肤点刺试验中,所有患者至少对其中一种过敏原呈阳性。在患者前臂执行了 19 种酶的皮肤点刺试验,如果呈阳性(13 名患者),则从血嗜碱粒细胞执行体外组胺释放。随后,使用进一步纯化的酶对皮肤点刺试验结果呈阳性的患者进行重新研究,最终按照双盲安慰剂对照协议,通过口服酶的方式进行研究。​只看到一例对安慰剂挑战有反应。在一些实例中,看到因酶引起的阳性皮肤点刺试验结果或阳性组胺释放,但由于在使用加大剂量酶(与正常每日摄入量相比)的后续口服挑战中,没有患者对任何市售酶呈阳性,因此发现结果没有临床相关性。研究包括大量广泛的酶类别和起源。由于引起过敏的发现结果没有临床相关性,因此我们推断,关于食品过敏,一般不需要担心食品酶的摄取。© 2006 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Mittag, D.、Batori, V.、Neudecker, P.、Wiche, R.、Friis, E.P.、Ballmer-Weber, B.K.、Vieths, S.、Roggen, E.L.
“在个体患者中研究 Bet v 1 和同源食品过敏原中的特异性和交叉反应性 IgE 表位的新方法”
《分子免疫学 (Molecular Immunology)》,第 43 卷第 3 期,第 268-278 页。(2006)

摘要

背景:具有临床相关性的过敏反应需要 IgE 在过敏原表面识别至少两种不同的表位。​这些表位可能是特异性表位,或交叉反应性表位。​而且,IgE 反应性的模式可能因患者而异。​本研究旨在比较个体患者之间的特异性和交叉反应性 IgE 表位与表位模式。我们使用​ Bet v 1 相关食品过敏作为模型。方法:通过交叉竞争 ELISA 法,针对 Bet v 1 及其同源化合物 Gly m 4(大豆)、Ara h 8(花生)和 Pru av 1(樱桃)中的特异性和交叉反应性 IgE,对五名患者进行了研究。使用来自个体血清的多克隆纯化 IgE,通过噬菌体展示随机 7 肽库的竞争免疫筛选,评估过敏原特异性和交叉反应性 IgE 表位。产生的肽模拟物使用基于计算机的算法映射在过敏原的 3D 结构表面。结果:竞争免疫筛选和肽映射确定了特定于患者的 IgE 表位模式。然而,所有四个蛋白质上均确定了由所有患者认可的一个 IgE 结合表面区域和由三名患者认可的两个区域。通过交叉竞争 ELISA 法,根据四种重组过敏原确定个体患者血清 IgE 交叉反应性的结果与这些结果相符。结论:选择噬菌体展示肽模拟物与来自过敏患者的血清 IgE,并通过基于计算机的方法将肽模拟物映射到三维过敏原结构表面,该前景光明的新工具可用于研究个体患者中的 IgE 表位特异性。有关表位结构的此类基本信息可用于预测新食品的交叉反应性和潜在过敏性。© 2005 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Batori, V.、Friis, E.P.、Nielsen, H.、Roggen, E.L.
“在结构环境中使用表位主题数据库预测抗原决定簇在蛋白质中位置的计算机方法”
《 分子识别杂志 (Journal of Molecular Recognition)》,第 19 卷第 1 期,第 21-29 页。(2006)

摘要​

目前,对蛋白质抗体复合物进行 X 射线晶体分析仍是最直接的 B 细胞表位识别方法。本研究的目的是在不需要详细信息的众多应用领域,例如开发药物蛋白、疫苗和工业酶,使用抗原氨基酸主题作为快速替代方法,以评估基于计算机的表位映射工具 (EMT) 的潜力。EMT 使用 Gal d 4 作为模型蛋白质,能够在折叠蛋白质的环境中识别已知参与抗体结合的氨基酸位置。EMT 的高敏感度和阳性预测值以及 EMT 建议的结构组合相关性表明,存在可能参与抗原决定簇的氨基酸主题。此外,微分映射显示,敏感度和阳性预测值取决于映射中所包含氨基酸的最小相对表面可接触性 (RSA),这证明 EMT 符合以下事实:表位是具有不同可接触程度的三维实体。与现有预测标度的对比表明,在物理-化学标度方面,EMT 更有优势。该映射工具的表现也比可用的结构标度更好,但差异的重要性仍有待确认。因此,如果不需要详细的表位信息,EMT 这种快速简单的方法可能会替代 X 射线晶体分析,以用于预测结构抗原决定簇。版权所有 © 2005 John Wiley & Sons, Ltd.

 

Lindstedt, M.、Schiött, Å.、Johnsen, C.R.、Roggen, E.、Johansson-Lindbom, B.、Borrebaeck, C.A.K.
“因洗涤剂酶引起职业性过敏的个人显示微分转录调节和细胞免疫应答”
《 临床与实验变态反应 (Clinical and Experimental Allergy)》,第 35 卷第 2 期,第 199-206 页。(2005)

摘要

背景:虽然提供重要的安全措施,但工业酶过敏仍然是需要重点关注的问题。越来越普遍的职业性过敏强调了对研究酶暴露树突细胞 (DC) 功能特性的需求,因为 DC 具有激活过敏原特定 T 细胞的强大能力。目标:本研究旨在阐明导致对脂肪酶(一种工业酶)产生过敏免疫应答的基本分子机制。为此,我们研究了低敏和野生型脂肪酶对 DC 中转录调节的影响,及其对记忆 CD4+ T 细胞的刺激作用。方法:五个对脂肪酶过敏(备有文件证明)的个体接受特异性血清 IgE 的试验。使用脂肪酶刺激来自这些个体的 DC,然后对 DC 进行分析,以确定其影响记忆 T 细胞增殖和分化的能力。使用全局表达分析以评估脂肪酶对 DC 转录活性的影响。结果:不同供体间的脂肪酶特异性 IgE 水平存在较大差异,其中供体 4 表现出最高水平,并且只在供体 4 中发现强大的特异性 CD4+ T 细胞回忆应答。当来自供体 4 的 T 细胞与使用低敏和野生型脂肪酶脉冲调制的 DC 共同培养时,没有在细胞因子谱中发现任何区别,具体表现为高 IL-4 和 IL-13 与低 IFN-γ 生产。然而,与无应答者相比,在来自供体 4 的 DC 中,脂肪酶可诱发不同的基因标记。结论:经临床诊断对脂肪酶过敏的个人的 DC 对体外低敏和野生型脂肪酶刺激表现出不同的反应。只有来自供体 4 的过敏原脉冲调制 DC 能够诱发 CD4+ T 细胞增殖。​脂肪酶特异性 T 细胞表现出 2 型辅助性 T 细胞表型,低敏脂肪酶脉冲调制的 DC 无法改变该表型。此外,与其他供体相比,从供体 4 衍生的 DC 和使用任意脂肪酶刺激的 DC 显示出不同的转录谱。这些标记代表具有潜在重要性的基因,在持续过敏反应中起到 DC 的免疫调节作用。© 2005 Blackwell Publishing Ltd.

 

Jakobsen, C.G.、Bodtger, U.、Kristensen, P.、Poulsen, L.K.、Roggen, E.L.
“从组合噬菌体库中识别 Bet v 1 与疏棉状腐质菌脂肪酶的高亲和性人体 IgE 与 IgG 抗体的分离”
《分子免疫学 (Molecular Immunology)》,第 41 卷第 10 期,第 941-953 页。(2004)

摘要

与组合 IgE 与 IgG 库分离的过敏原特异性 Fab 片段对于研究过敏原-抗体相互作用十分有用。为了描述不同过敏原和抗体之间的相互作用,我们以 Fab 格式创建了重组人体噬菌体抗体库。已从对桦树花粉或脂肪酶过敏的患者中创建了人体 IgE 和 IgG 库。这些库已用于选择可识别主要桦树花粉过敏原 Bet v 1 与疏棉状腐质菌脂肪酶的粘合剂。识别了一组过敏原特异性 IgE 和 IgG 抗体;使用 Biacore 的过敏原结合研究与使用人血清和从人血清中纯化的抗体的竞争研究进一步描述了这些抗体的特征。记录了处于 nM 范围的亲和性,并观察了针对过敏原结合而与人血清的竞争。© 2004 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Ahmad, S.K.、Brinch, D.S.、Friis, E.P.、Pedersen, P.B.
“关于以镰孢霉表达的微座孢属斑病中的乳糖氧化酶的毒理学研究”
《毒理学与药理学监管 (Regulatory Toxicology and Pharmacology)》,第 39 卷第 3 期,第 256-270 页。(2004)

摘要

已发现一种具有高特异性的新型糖类氧化酶,乳糖氧化酶,可将二糖乳糖氧化成乳糖醛酸。这种酶​适用于众多应用领域。我们开展了毒理学研究项目,以确定乳糖氧化酶用作食品行业加工助剂的安全性。本研究所使用的酶通过对镰孢菌进行深层发酵产生,并包含微座孢属斑病中的基因密码。连续 13 周每天给大鼠口服多达 10mL/kg 体重 (bw)(相当于每天 900mg/kgbw 的总有机固体剂量,或每天 344LOXU/kgbw 的乳糖氧化酶剂量)并未造成任何不良影响。在细菌回复突变试验中,未发现乳糖氧化酶的致突变性,在培养的人体淋巴细胞中,也没有引起染色体畸变。乳糖氧化酶的最大推荐剂量为 50LOXU/kg 液体浓缩乳清蛋白。根据估计,对于每日乳制品消耗,安全暴露裕度至少为 6.2×104。​综上所述,乳糖氧化酶可安全用于食品行业。© 2003 Elsevier Inc. 保留所有权利。

 

J.T.Andersen;T. Schafer;P.L Jørgensen;S. Møller.
“使用灭活微生物量作为肥料:环境中抗生素抗性基因的演变”
《微生物学研究 (Research in Microbiology)》,第 152 卷第 9 期,823-833 (2001)

摘要

Novo Nordisk A/S 从微生物发酵中产生的废物在经过热和化学品处理以破坏微生物后用作丹麦的农业肥料 (NovoGro (TM))。肥料含有来自工业生产中使用的基因修饰微生物的 DNA 片段。该 DNA 含有所需工业产物的基因编码以及在生产菌株发育期间用作遗传选择标记的基因。用作遗传选择标记的抗生素抗性标记是氯霉素 (Cm)、卡那霉素 (Km) 和氨苄青霉素 (Ap)。本研究的目的是检查在 NovoGro 中是否存在 DNA 和完整基因,以及是否在实验室或用 NovoGro 处理的田地中发生失活的生产菌株分离 DNA 的水平转移。通过 PCR 分析从 NovoGro 分离的 DNA,并扩增蛋白酶和氯霉素抗性的完整基因编码。该分离的 DNA 用于包括电穿孔和转化的体外实验,但是没有观察到 DNA 转移至大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。用 NovoGro 处理的田间土著细菌种群的抗生素抗性谱与用无机肥料处理的田地相比没有差异。另外,通过 PCR 分析直接从经 NovoGro 处理长达 7 年的田地分离的 DNA,并且无法检测到特异性生产基因构建体。(2002)
背景:虽然提供重要的安全措施,但工业酶过敏仍然是需要重点关注的问题。越来越普遍的职业性过敏强调了对研究酶暴露树突细胞 (DC) 功能特性的需求,因为 DC 具有激活过敏原特定 T 细胞的强大能力。目标:本研究旨在阐明导致对脂肪酶(一种工业酶)产生过敏免疫应答的基本分子机制。为此,我们研究了低敏和野生型脂肪酶对 DC 中转录调节的影响,及其对记忆 CD4+ T 细胞的刺激作用。方法:五个对脂肪酶过敏(备有文件证明)的个体接受特异性血清 IgE 的试验。使用脂肪酶刺激来自这些个体的 DC,然后对 DC 进行分析,以确定其影响记忆 T 细胞增殖和分化的能力。使用全局表达分析以评估脂肪酶对 DC 转录活性的影响。结果:不同供体间的脂肪酶特异性 IgE 水平存在较大差异,其中供体 4 表现出最高水平,并且只在供体 4 中发现强大的特异性 CD4+ T 细胞回忆应答。当来自供体 4 的 T 细胞与使用低敏和野生型脂肪酶脉冲调制的 DC 共同培养时,没有在细胞因子谱中发现任何区别,具体表现为高 IL-4 和 IL-13 与低 IFN-γ 生产。然而,与无应答者相比,在来自供体 4 的 DC 中,脂肪酶可诱发不同的基因标记。结论:经临床诊断对脂肪酶过敏的个人的 DC 对体外低敏和野生型脂肪酶刺激表现出不同的反应。只有来自供体 4 的过敏原脉冲调制 DC 能够诱发 CD4+ T 细胞增殖。​脂肪酶特异性 T 细胞表现出 2 型辅助性 T 细胞表型,低敏脂肪酶脉冲调制的 DC 无法改变该表型。此外,与其他供体相比,从供体 4 衍生的 DC 和使用任意脂肪酶刺激的 DC 显示出不同的转录谱。这些标记代表具有潜在重要性的基因,在持续过敏反应中起到 DC 的免疫调节作用。© 2005 Blackwell Publishing Ltd.

 

Jakobsen, C.G.、Bodtger, U.、Kristensen, P.、Poulsen, L.K.、Roggen, E.L.
“从组合噬菌体库中识别 Bet v 1 与疏棉状腐质菌脂肪酶的高亲和性人体 IgE 与 IgG 抗体的分离”
《分子免疫学 (Molecular Immunology)》,第 41 卷第 10 期,第 941-953 页。(2004)

摘要

与组合 IgE 与 IgG 库分离的过敏原特异性 Fab 片段对于研究过敏原-抗体相互作用十分有用。为了描述不同过敏原和抗体之间的相互作用,我们以 Fab 格式创建了重组人体噬菌体抗体库。已从对桦树花粉或脂肪酶过敏的患者中创建了人体 IgE 和 IgG 库。这些库已用于选择可识别主要桦树花粉过敏原 Bet v 1 与疏棉状腐质菌脂肪酶的粘合剂。识别了一组过敏原特异性 IgE 和 IgG 抗体;使用 Biacore 的过敏原结合研究与使用人血清和从人血清中纯化的抗体的竞争研究进一步描述了这些抗体的特征。记录了处于 nM 范围的亲和性,并观察了针对过敏原结合而与人血清的竞争。© 2004 Elsevier Ltd. 保留所有权利。

 

Ahmad, S.K.、Brinch, D.S.、Friis, E.P.、Pedersen, P.B.
“关于以镰孢霉表达的微座孢属斑病中的乳糖氧化酶的毒理学研究”
《毒理学与药理学监管 (Regulatory Toxicology and Pharmacology)》,第 39 卷第 3 期,第 256-270 页。(2004)

摘要

已发现一种具有高特异性的新型糖类氧化酶,乳糖氧化酶,可将二糖乳糖氧化成乳糖醛酸。这种酶​适用于众多应用领域。我们开展了毒理学研究项目,以确定乳糖氧化酶用作食品行业加工助剂的安全性。本研究所使用的酶通过对镰孢菌进行深层发酵产生,并包含微座孢属斑病中的基因密码。连续 13 周每天给大鼠口服多达 10mL/kg 体重 (bw)(相当于每天 900mg/kgbw 的总有机固体剂量,或每天 344LOXU/kgbw 的乳糖氧化酶剂量)并未造成任何不良影响。在细菌回复突变试验中,未发现乳糖氧化酶的致突变性,在培养的人体淋巴细胞中,也没有引起染色体畸变。乳糖氧化酶的最大推荐剂量为 50LOXU/kg 液体浓缩乳清蛋白。根据估计,对于每日乳制品消耗,安全暴露裕度至少为 6.2×104。​综上所述,乳糖氧化酶可安全用于食品行业。© 2003 Elsevier Inc. 保留所有权利。

 

J.T.Andersen;T. Schafer;P.L Jørgensen;S. Møller.
“使用灭活微生物量作为肥料:环境中抗生素抗性基因的演变”
《微生物学研究 (Research in Microbiology)》,第 152 卷第 9 期,823-833 (2001)

摘要

Novo Nordisk A/S 从微生物发酵中产生的废物在经过热和化学品处理以破坏微生物后用作丹麦的农业肥料 (NovoGro (TM))。肥料含有来自工业生产中使用的基因修饰微生物的 DNA 片段。该 DNA 含有所需工业产物的基因编码以及在生产菌株发育期间用作遗传选择标记的基因。用作遗传选择标记的抗生素抗性标记是氯霉素 (Cm)、卡那霉素 (Km) 和氨苄青霉素 (Ap)。本研究的目的是检查在 NovoGro 中是否存在 DNA 和完整基因,以及是否在实验室或用 NovoGro 处理的田地中发生失活的生产菌株分离 DNA 的水平转移。通过 PCR 分析从 NovoGro 分离的 DNA,并扩增蛋白酶和氯霉素抗性的完整基因编码。该分离的 DNA 用于包括电穿孔和转化的体外实验,但是没有观察到 DNA 转移至大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。用 NovoGro 处理的田间土著细菌种群的抗生素抗性谱与用无机肥料处理的田地相比没有差异。另外,通过 PCR 分析直接从经 NovoGro 处理长达 7 年的田地分离的 DNA,并且无法检测到特异性生产基因构建体。(2002)