Basketter, D., Berg, N., Broekhuizen, C., Fieldsend, M., Kirkwood, S., Kluin, C., Mathieu, S., Rodriguez, C. 
“Enzymes in cleaning products: An overview of toxicological properties and risk assessment/management”
Reg. Toxicol. Pharmacol, 64(1), pp. 117-123. (2012)

Resumo

As enzimas utilizadas nos produtos de limpeza têm um excelente perfil de segurança, com pouca capacidade de causar respostas adversas em humanos. A toxicidade aguda, a genotoxicidade e a toxicidade subaguda e de doses repetidas das enzimas são insignificantes. A toxicidade reprodutiva e a carcinogenicidade também não são endpoints de preocupação. As exceções são a capacidade de algumas proteases de produzir efeitos irritantes em altas concentrações e, mais importante, o potencial intrínseco dessas proteínas bacterianas/fúngicas de atuar como sensibilizadores respiratórios. É uma suposição razoável que a maioria das proteínas enzimáticas possui esse risco. No entanto, os métodos para a caracterização do risco de sensibilização respiratória das enzimas estão ausentes e as informações necessárias para a avaliação de riscos e a gestão de riscos, embora suficientes, permanecem limitadas. Anteriormente, a maioria dos dados foi gerada em modelos animais e em imunoensaios in vitro que avaliam a reatividade cruzada imunológica. No entanto, através do estabelecimento de limites rigorosos na exposição aérea (com base em um limite de efeito mínimo definido de 60 ng de proteína de enzima ativa/m3) e do monitoramento do ar e da saúde, a segurança ocupacional pode ser assegurada. Da mesma forma, ao garantir que a exposição aérea seja mantida de forma semelhante, associada ao conhecimento do destino dessas enzimas na pele e nos tecidos, provou-se que é possível estabelecer uma longa história de uso seguro de produtos contendo enzimas. © 2012 Elsevier Inc. Todos os direitos reservados.

 

Basketter, D., Berg, N., Kruszewski, F., Sarlo, K., Concoby, B. 
“Relevance of sensitization to occupational allergy and asthma in the detergent industry” 
J. Immunotox. 9(3), pp. 314-319. (2012)

Resumo

Há uma experiência histórica considerável sobre a relação entre ambas a indução de sensibilização e a elicitação de sintomas respiratórios e a exposição a enzimas industriais de origem bacteriana e fúngica usadas em uma grande variedade de produtos detergentes. A indústria de detergentes, em particular, tem uma experiência substancial de como o controle da exposição leva à limitação da sensibilização com baixo risco de sintomas. No entanto, a experiência também mostra que há lacunas substanciais no conhecimento, mesmo quando o potencial problema de alergia ocupacional está firmemente sob controle, e também que a relação entre a exposição e a sensibilização pode ser difícil de estabelecer. O último aspecto inclui uma desvalorização de como exposições máximas e baixos níveis de exposição ao longo do tempo contribuem para a sensibilização. Além disso, embora uma minoria de trabalhadores desenvolva IgE específica, essencialmente nenhum deles parece ter sintomas, uma situação que contraria o dogma da alergia que, uma vez sensibilizado, o indivíduo reagirá a níveis de exposição muito menores. Para as enzimas, a expressão dos sintomas ocorre em níveis semelhantes ou superiores aos que causam indução. Apesar de algumas lacunas no conhecimento, os programas de vigilância médica e o constante monitoramento do ar fornecem ferramentas para a gestão bem-sucedida das enzimas no ambiente ocupacional. Em última análise, o conhecimento obtido no contexto ocupacional facilita a conclusão das avaliações de segurança para a exposição do consumidor às enzimas de detergentes. Tais avaliações foram comprovadas como corretas pelas décadas de uso seguro tanto ocupacional quanto de produtos de consumo. © 2012 Informa Healthcare. Todos os direitos reservados.

 

Basketter, D., Berg, N., Kruszewski, F., Sarlo, K., Concoby, B. 
“The toxicology and immunology of detergent enzymes” 
J. Immunotox 9(3), pp. 320-326. (2012)

Resumo

As enzimas de detergentes têm um perfil de segurança muito bom, com capacidade quase nula de gerar respostas adversas agudas ou crônicas em seres humanos. As exceções são a capacidade limitada de algumas proteases de produzir efeitos irritantes em altas concentrações e o potencial intrínseco dessas proteínas bacterianas e fúngicas de atuar como sensibilizadores respiratórios, conforme demonstrado em seres humanos durante a fase inicial do uso industrial de enzimas nas décadas de 1960 e 1970. O modo como as enzimas geram essas respostas está começando a ser esclarecido, com uma avaliação em desenvolvimento do(s) mecanismo(s) da superfície celular pelo(s) qual(is) a atividade enzimática promove as respostas das células T-helper (TH)-2, levando à geração de IgE. É uma suposição razoável que a maioria das proteínas enzimáticas possui esse risco intrínseco. No entanto, os métodos toxicológicos para melhor caracterização do risco de sensibilização respiratória de enzimas individuais permanecem uma área problemática, com a consequência de que as informações disponíveis para a avaliação/gestão de risco, embora suficientes, sejam limitadas. A maior parte dessas informações foi gerada no passado em modelos animais e em imunoensaios in vitro que avaliam a reatividade cruzada imunológica. Em última análise, ao compreender de forma mais completa os mecanismos que impulsionam a resposta de IgE às enzimas, será possível desenvolver melhores métodos para a caracterização de perigo e consequentemente para a avaliação e a gestão de risco. © 2012 Informa Healthcare. Todos os direitos reservados.

 

Basketter, D.A., Broekhuizen, C., Fieldsend, M., Kirkwood, S., Mascarenhas, R., Maurer, K., Pedersen, C., Rodriguez, C., Schiff, H.-E.
“Defining occupational and consumer exposure limits for enzyme protein respiratory allergens under REACH”
Toxicology (268), pp. 165-170. (2010)

Resumo

Uma ampla variedade de substâncias tem sido reconhecida como sensibilizante, tanto para a pele como para o sistema respiratório. Muitas dessas substâncias são materiais úteis, portanto, para garantir que elas possam ser utilizadas com segurança, é necessário caracterizar os perigos e estabelecer limites de exposição adequados. De acordo com a nova legislação da União Europeia (REACH), há a necessidade de definir um nível derivado de exposição sem efeitos (DNEL, na sua sigla em inglês). Onde um DNEL não pode ser estabelecido, por exemplo, para substâncias sensibilizadoras, é recomendado um nível derivado de exposição com efeitos mínimos (DMEL, na sua sigla em inglês). Para as enzimas bacterianas e fúngicas que são sensibilizadores respiratórios bem reconhecidos e têm uso generalizado na indústria, bem como em uma variedade de produtos de consumo, um DMEL pode ser estabelecido por uma revisão retrospectiva completa da experiência ocupacional e do consumidor. Em particular, a definição dos dados de vigilância médica validados dos funcionários contra os registros de exposição gerados durante um longo período de tempo é vital para informar o DMEL ocupacional. Essa experiência mostra que um limite estabelecido há muito tempo de 60 ng/m3 para proteína de enzima pura tem sido um ponto de partida bem-sucedido na definição de limites de saúde ocupacional para sensibilização na indústria de detergentes. O uso de fatores de ajuste limitou a indução de sensibilização, evitou qualquer risco significativo de elicitação de sintomas com enzimas conhecidas e proporcionou um nível adequado de segurança para novas enzimas cuja potência não foi totalmente caracterizada. Por exemplo, na indústria de detergentes, isso levou ao uso geral de limites de exposição ocupacional 3–10 vezes menores do que o ponto de partida de 60 ng/m3. Em contrapartida, os limites de exposição do consumidor variam porque os próprios tipos de exposição compõem uma ampla variedade. Os maiores níveis que se mostram seguros em uso, 15 ng/m3, estão associados ao uso de sprays para roupas, mas níveis muito baixos (por exemplo, 0,01 ng/m3) são comumente associados a outros tipos de exposição segura. Os limites do consumidor geralmente se situarão entre esses valores e dependerão da exposição real associada ao uso do produto. © 2009 Elsevier Ireland Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Vinken, M., Doktorova, T., Ellinger-Ziegelbauer, H., Ahr, H.-J., Lock, E., Carmichael, P., Roggen, E., van Delft, J., Kleinjans, J., Castell, J., Bort, R., Donato, T., Ryan, M., Corvi, R., Keun, H., Ebbels, T., Athersuch, T., Sansone, S.-A., Rocca-Serra, P., Stierum, R., Jennings, P., Pfaller, W., Gmuender, H., Vanhaecke, T., Rogiers, V.
"The carcinoGENOMICS project: Critical selection of model compounds for the development of omics-based in vitro carcinogenicity screening assays"
Mutation Research-Reviews in Mutation Research, . Article in Press. (2008)

Resumo

Alterações recentes nas substâncias químicas na legislação europeia obrigaram a comunidade científica a acelerar a busca de métodos alternativos que poderiam substituir parcial ou totalmente a experimentação animal. O projeto do Programa Sixth Framework, carcinoGENOMICS, foi criado especificamente para o desenvolvimento de triagens in vitro baseadas em ômicas para testar o potencial carcinogênico de compostos químicos em um contexto pan-europeu. Este artigo fornece uma análise aprofundada da complexidade da escolha de compostos de referência adequados utilizados para a criação e ajuste de ensaios de carcinogenicidade in vitro. Primeiro, são definidos vários critérios sólidos para a seleção dos compostos modelo. Em segundo lugar, é descrita a estratégia seguida, incluindo os recursos consultados, e os compostos selecionados são brevemente ilustrados. Finalmente, são discutidas as limitações e os problemas encontrados durante o procedimento de seleção. Como a seleção de um conjunto adequado de substâncias químicas é um impedimento comum nos estágios iniciais de projetos de pesquisa semelhantes, as informações fornecidas neste artigo podem ser extremamente valiosas. © 2008.

 

Devin, M., Mortellaro, S.
"Catering for an animal-free culture"
Manufacturing Chemist, 79 (3), pp. 27-28. (2008)

Larsen, A.I., Johnsen, C.R., Frickmann, J., Mikkelsen, S.
"Incidence of respiratory sensitisation and allergy to enzymes among employees in an enzyme producing plant and the relation to exposure and host factors"
Occupational and Environmental Medicine, 64 (11), pp. 763-768. (2007)

Resumo

Objetivos: pertencentes ao grupo de sensibilizadores respiratórios de alto peso molecular, as enzimas microbianas foram relatadas como uma causa bem conhecida de alergia ocupacional, manifestando-se tipicamente como rinite e/ou asma. A elevada exposição a sensibilizadores de alto peso molecular, e possivelmente também exposições máximas, implica um risco maior do que uma baixa exposição, mas a relação exata entre a exposição, a sensibilização e a alergia clínica continua desconhecida. Os autores procuraram estimar o risco de alergia a enzimas respiratórias em uma indústria produtora de enzimas e avaliar a relação entre os índices de exposição e a alergia. Métodos: estudo de acompanhamento retrospectivo com base em dados coletados da vigilância da saúde desde 1970. Foram incluídos 1.207 funcionários da produção e de laboratórios. O nível de exposição da enzima nos departamentos relevantes foi estimado retrospectivamente em cinco níveis de exposição com base em aumentos/diminuições de 10 vezes o valor limite e outras informações de exposição. O risco foi estimado em um modelo de sobrevivência de regressão exponencial ajustado com intensidade constante para subperíodos de tempo utilizando a estimativa de máxima verossimilhança. Resultados: durante os três primeiros anos do trabalho de um funcionário, as taxas de incidência de alergia e sensibilização de enzimas foram de 0,13 e 0,03 por pessoa-ano em risco, respectivamente. Nos modelos ajustados, a classe de exposição não se correlacionou com as variáveis de resultado. O risco de sensibilização diminuiu ao longo das três décadas, enquanto o risco de alergia permaneceu inalterado. O risco de sensibilização e alergia foi o dobro entre os fumantes. A atopia pré-trabalho foi associada somente ao risco de sensibilização. Conclusão: a sensibilização às enzimas diminuiu durante o período de estudo, possivelmente refletindo melhorias no ambiente de trabalho. Uma diminuição semelhante não pôde ser demonstrada para a alergia a enzimas. Nenhum dos dois resultados se correlacionou com as estimativas de exposição, possivelmente devido à baixa precisão das estimativas.

 

Rovida, C., Basketter, D., Casati, S., De Silva, O., Hermans, H., Kimber, I., Manou, I., Weltzien, H.U., Roggen, E.
"Management of an integrated project (Sens-it-iv) to develop in vitro tests to assess sensitisation"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (3), pp. 317-322. (2007)

Resumo

O Sens-it-iv é um projeto integrado, financiado pelo European Commission Framework Programme 6, cujo objetivo geral é o desenvolvimento de testes in vitro e estratégias de teste a serem utilizados pelas indústrias química, cosmética e farmacêutica para avaliar o risco de potenciais sensibilizadores respiratórios e de contato. Esses testes, uma vez formalmente validados e aceitos, permitirão a avaliação do potencial de sensibilização dos produtos e entidades químicas novas e existentes das indústrias europeias para classificação e rotulagem, conforme exigido pela nova legislação REACH da UE sobre produtos químicos, ou para o propósito de avaliação de risco, conforme exigido pela 7ª Emenda à Diretiva de cosméticos da UE. A Sens-it-iv envolve 28 parceiros, representando indústrias, universidades e órgãos regulatórios, incluindo vários institutos nos Estados-Membros da UE e diferentes competências, todos com o objetivo comum de alcançar um produto final: o aumento da segurança dos produtos de consumo aliado à redução da experimentação com animais. Este artigo fornece uma visão geral da estrutura do projeto e uma descrição detalhada da organização de sua gestão.

 

Mortellaro, S., Devine, M.
"Advances in animal-free manufacturing of biopharmaceuticals"
BioPharm International, 20 (5 SUPPL.), pp. 30-37. (2007)

Kimber, I., Agius, R., Basketter, D.A., Corsini, E., Cullinan, P., Dearman, R.J., Gimenez-Arnau, E., Greenwell, L., Hartung, T., Kuper, F., Maestrelli, P., Roggen, E., Rovida, C., Casati, S.
"Chemical respiratory allergy: Opportunities for hazard identification and characterisation"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (2), pp. 243-265. (2007)

Basketter, D., Pease, C., Kasting, G., Kimber, I., Casati, S., Cronin, M., Diembeck, W., Gerberick, F., Hadgraft, J., Hartung, T., Marty, J.P., Nikolaidis, E., Patlewicz, G., Roberts, D., Roggen, E., Rovida, C., Van De Sandt, J.
"Skin sensitisation and epidermal disposition: The relevance of epidermal disposition for sensitisation hazard identification and risk assessment: The report and recommendations of ECVAM workshop 59a"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (1), pp. 137-154. (2007)

Roggen, E.L., Soni, N.K., Verheyen, G.R.
"Respiratory immunotoxicity: An in vitro assessment"
Toxicology in Vitro, 20 (8), pp. 1249-1264. (2006)

Resumo

Ainda não é possível avaliar in vitro a potência imunotóxica dos agentes respiratórios. A complexidade do endpoint e do sistema respiratório e a disponibilidade limitada de agentes respiratórios bem documentados são os principais motivos. A evidência de que células epiteliais (CEs) são estimuladas por compostos a expressar mediadores solúveis e proteínas de superfície in vitro estimulou seu uso no desenvolvimento de testes de imunotoxicidade respiratória. Foi avaliada uma variedade de linhagens de CEs e CEs das vias aéreas, mas as informações disponíveis parecem indicar as células alveolares humanas (por exemplo, A549) como o tipo de célula mais conveniente. Os formatos de teste baseados em CEs com vários graus de complexidade foram avaliados. Até o momento, foram obtidos resultados promissores usando um modelo 3D com a linhagem de células pulmonares A549 humanas. As células dendríticas (CDs) foram submetidas a pesquisas intensivas. No entanto, os testes atualmente disponíveis não são adequados para discernir a potência dos sensibilizadores. As explicações potenciais incluem a falta de protocolos padronizados para a geração de CDs, a ausência de padrões adequados para estimar a qualidade das culturas de CDs derivadas in vitro e a dinâmica limitada dos pontos finais atualmente utilizados. Os macrófagos alveolares (MAs) têm recebido menos atenção. Isso pode se mostrar injustificado, pois os macrófagos podem vincular respostas inatas à imunidade adaptativa. A observação de que CEs, CDs e MAs se afetam sugere que formatos de teste são necessários combinando pelo menos dois desses tipos de células se o objetivo for a classificação dos compostos de acordo com sua potência de sensibilização. Além disso, a capacidade dos compostos de atravessar uma membrana celular é uma propriedade importante de um composto imunotóxico, que pode ser avaliada apenas em modelos 3D de tecido humano reconstituído. Embora dados promissores tenham sido relatados para pele, o pulmão humano imunocompetente reconstituído em 3D continua a ser avaliado para a imunotoxicidade respiratória. Obviamente, o sucesso de qualquer um desses testes simplificados (em comparação com a complexidade da resposta imune) é altamente dependente da disponibilidade de biomarcadores de fase inicial (expressos a nível da barreira da mucosa), que são preditivos para mecanismos de imunotoxicidade relevantes que ocorrem a jusante na resposta imune. Até o momento esses biomarcadores ainda não estão disponíveis. © 2006 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Bindslev-Jensen, C., Skov, P.S., Roggen, E.L., Hvass, P., Brinch, D.S.
"Investigation on possible allergenicity of 19 different commercial enzymes used in the food industry"
Food and Chemical Toxicology, 44 (11), pp. 1909-1915. (2006)

Resumo

O objetivo do estudo foi investigar a segurança para pacientes alérgicos de 19 enzimas comercialmente disponíveis e aprovadas pelas autoridades que são utilizadas na indústria alimentícia. Enzimas produzidas por organismos geneticamente modificados foram incluídas. Foram incluídos quatrocentos pacientes adultos consecutivos com alergia a alérgenos inalatórios, alérgenos alimentares, abelhas ou vespas. Todos apresentaram pelo menos um teste cutâneo de alergia (prick test) positivo para os alérgenos acima. O teste cutâneo de alergia com as 19 enzimas fora realizado no antebraço e, em caso positivo (em 13 pacientes), a liberação in vitro de histamina de basófilos no sangue foi realizada. Os pacientes com resultados positivos no teste cutâneo de alergia subsequentemente foram recrutados com outras enzimas purificadas e, finalmente, foram desafiados oralmente com as enzimas em um protocolo duplo-cego e controlado por placebo. Foi observada apenas uma reação a um desafio de placebo. Em alguns casos, foi observado um resultado positivo do teste cutâneo de alergia ou uma liberação positiva de histamina induzida pelas enzimas, porém, como nenhum dos pacientes apresentou resultado positivo para qualquer uma das enzimas comerciais nos desafios orais subsequentes usando doses exageradas das enzimas em comparação com a ingestão diária normal, os resultados não têm relevância clínica. Uma grande variedade de classes e origens de enzimas foi incluída no estudo. Como não houve achados alergênicos de relevância clínica, concluiu-se que a ingestão de enzimas alimentares, em geral, não é considerada uma preocupação em relação à alergia alimentar. © 2006 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Mittag, D., Batori, V., Neudecker, P., Wiche, R., Friis, E.P., Ballmer-Weber, B.K., Vieths, S., Roggen, E.L.
"A novel approach for investigation of specific and cross-reactive IgE epitopes on Bet v 1 and homologous food allergens in individual patients"
Molecular Immunology, 43 (3), pp. 268-278. (2006)

Resumo

Retrospecto: uma reação alérgica clinicamente relevante requer o reconhecimento por IgE de pelo menos dois epítopos diferentes na superfície do alérgeno. Esses epítopos podem ser específicos ou de reatividade cruzada. Além disso, os padrões de reatividade da IgE podem ser específicos do paciente. O objetivo do nosso estudo foi comparar epítopos específicos e de reatividade cruzada da IgE e padrões de epítopos entre pacientes individuais. Utilizamos alergia alimentar relacionada com Bet v 1 como modelo. Métodos: cinco pacientes foram investigados por ELISA competitivo para IgE específica e de reatividade cruzada para Bet v 1 e seus homólogos Gly m 4 (soja), Ara h 8 (amendoim) e Pru av 1 (cereja). Os epítopos de IgE específicos de alérgeno e de reatividade cruzada foram avaliados por imunotransferência competitiva de uma biblioteca de peptídeos randomizados 7-mer com exibição em fagos utilizando IgE purificada policlonal a partir de soros individuais. Os imitadores de peptídeos resultantes foram mapeados na superfície da estrutura 3D dos alérgenos usando um algoritmo baseado em computador. Resultados: a imunotriagem competitiva e o mapeamento de epítopos identificaram padrões de epítopos da IgE específicos do paciente. No entanto, uma superfície de ligação à IgE reconhecida por todos os pacientes e duas reconhecidas por três pacientes foram identificadas nas quatro proteínas. Esses resultados são consistentes com a determinação da reatividade cruzada da IgE dos soros de pacientes individuais contra os quatro alérgenos recombinantes por ELISA competitivo. Conclusões: a seleção de imitadores de peptídeos com exibição em fagos com IgE sérica de pacientes alérgicos em combinação com o mapeamento baseado em computador dos imitadores de peptídeos na superfície da estrutura tridimensional de alérgenos é uma ferramenta inovadora e promissora para investigar a especificidade dos epítopos de IgE em pacientes individuais. Essas informações básicas sobre a estrutura dos epítopos podem ser usadas para a predição da reatividade cruzada e do potencial de alergenicidade de novos alimentos. © 2005 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Batori, V., Friis, E.P., Nielsen, H., Roggen, E.L.
"An in silico method using an epitope motif database for predicting the location of antigenic determinants on proteins in a structural context"
Journal of Molecular Recognition, 19 (1), pp. 21-29. (2006)

Resumo

Atualmente, a cristalografia de raios X de complexos de proteína e anticorpo ainda é o modo mais direto de identificar epítopos de células B. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de uma ferramenta de mapeamento de epítopos (EMT, na sua sigla em inglês) baseada em computador usando motivos de aminoácidos antigênicos como uma alternativa rápida em uma série de aplicações que não requerem informações detalhadas, por exemplo, desenvolvimento de proteínas farmacêuticas, vacinas e enzimas industriais. Usando Gal d 4 como uma proteína modelo, a EMT foi capaz de identificar, no contexto da proteína dobrada, as posições de aminoácidos conhecidas por estarem envolvidas na ligação do anticorpo. A alta sensibilidade e o valor preditivo positivo da EMT, bem como a relevância das associações estruturais sugeridas pela EMT, indicaram a existência de motivos de aminoácidos que provavelmente estão envolvidos em determinantes antigênicos. Além disso, o mapeamento diferencial revelou que a sensibilidade e o valor preditivo positivo foram dependentes da acessibilidade superficial relativa (RSA, na sua sigla em inglês) mínima dos aminoácidos incluídos no mapeamento, demonstrando que as EMTs são acomodadas pelo fato de que os epítopos são entidades tridimensionais com vários graus de acessibilidade. A comparação com as escalas de predição existentes demonstrou a superioridade da EMT em relação às escalas físico-químicas. A ferramenta de mapeamento também funcionou melhor do que as escalas estruturais disponíveis, mas a significância das diferenças continua não estabelecida. Portanto, a EMT tem potencial para se tornar uma alternativa rápida e simples à cristalografia de raios X para prever determinantes antigênicos estruturais se não forem necessárias informações detalhadas dos epítopos. Copyright © 2005 John Wiley & Sons, Ltd.

 

Basketter, D., Berg, N., Broekhuizen, C., Fieldsend, M., Kirkwood, S., Kluin, C., Mathieu, S., Rodriguez, C. 
“Enzymes in cleaning products: An overview of toxicological properties and risk assessment/management”
Reg. Toxicol. Pharmacol, 64(1), pp. 117-123. (2012)

Resumo

As enzimas utilizadas nos produtos de limpeza têm um excelente perfil de segurança, com pouca capacidade de causar respostas adversas em humanos. A toxicidade aguda, a genotoxicidade e a toxicidade subaguda e de doses repetidas das enzimas são insignificantes. A toxicidade reprodutiva e a carcinogenicidade também não são endpoints de preocupação. As exceções são a capacidade de algumas proteases de produzir efeitos irritantes em altas concentrações e, mais importante, o potencial intrínseco dessas proteínas bacterianas/fúngicas de atuar como sensibilizadores respiratórios. É uma suposição razoável que a maioria das proteínas enzimáticas possui esse risco. No entanto, os métodos para a caracterização do risco de sensibilização respiratória das enzimas estão ausentes e as informações necessárias para a avaliação de riscos e a gestão de riscos, embora suficientes, permanecem limitadas. Anteriormente, a maioria dos dados foi gerada em modelos animais e em imunoensaios in vitro que avaliam a reatividade cruzada imunológica. No entanto, através do estabelecimento de limites rigorosos na exposição aérea (com base em um limite de efeito mínimo definido de 60 ng de proteína de enzima ativa/m3) e do monitoramento do ar e da saúde, a segurança ocupacional pode ser assegurada. Da mesma forma, ao garantir que a exposição aérea seja mantida de forma semelhante, associada ao conhecimento do destino dessas enzimas na pele e nos tecidos, provou-se que é possível estabelecer uma longa história de uso seguro de produtos contendo enzimas. © 2012 Elsevier Inc. Todos os direitos reservados.

 

Basketter, D., Berg, N., Kruszewski, F., Sarlo, K., Concoby, B. 
“Relevance of sensitization to occupational allergy and asthma in the detergent industry” 
J. Immunotox. 9(3), pp. 314-319. (2012)

Resumo

Há uma experiência histórica considerável sobre a relação entre ambas a indução de sensibilização e a elicitação de sintomas respiratórios e a exposição a enzimas industriais de origem bacteriana e fúngica usadas em uma grande variedade de produtos detergentes. A indústria de detergentes, em particular, tem uma experiência substancial de como o controle da exposição leva à limitação da sensibilização com baixo risco de sintomas. No entanto, a experiência também mostra que há lacunas substanciais no conhecimento, mesmo quando o potencial problema de alergia ocupacional está firmemente sob controle, e também que a relação entre a exposição e a sensibilização pode ser difícil de estabelecer. O último aspecto inclui uma desvalorização de como exposições máximas e baixos níveis de exposição ao longo do tempo contribuem para a sensibilização. Além disso, embora uma minoria de trabalhadores desenvolva IgE específica, essencialmente nenhum deles parece ter sintomas, uma situação que contraria o dogma da alergia que, uma vez sensibilizado, o indivíduo reagirá a níveis de exposição muito menores. Para as enzimas, a expressão dos sintomas ocorre em níveis semelhantes ou superiores aos que causam indução. Apesar de algumas lacunas no conhecimento, os programas de vigilância médica e o constante monitoramento do ar fornecem ferramentas para a gestão bem-sucedida das enzimas no ambiente ocupacional. Em última análise, o conhecimento obtido no contexto ocupacional facilita a conclusão das avaliações de segurança para a exposição do consumidor às enzimas de detergentes. Tais avaliações foram comprovadas como corretas pelas décadas de uso seguro tanto ocupacional quanto de produtos de consumo. © 2012 Informa Healthcare. Todos os direitos reservados.

 

Basketter, D., Berg, N., Kruszewski, F., Sarlo, K., Concoby, B. 
“The toxicology and immunology of detergent enzymes” 
J. Immunotox 9(3), pp. 320-326. (2012)

Resumo

As enzimas de detergentes têm um perfil de segurança muito bom, com capacidade quase nula de gerar respostas adversas agudas ou crônicas em seres humanos. As exceções são a capacidade limitada de algumas proteases de produzir efeitos irritantes em altas concentrações e o potencial intrínseco dessas proteínas bacterianas e fúngicas de atuar como sensibilizadores respiratórios, conforme demonstrado em seres humanos durante a fase inicial do uso industrial de enzimas nas décadas de 1960 e 1970. O modo como as enzimas geram essas respostas está começando a ser esclarecido, com uma avaliação em desenvolvimento do(s) mecanismo(s) da superfície celular pelo(s) qual(is) a atividade enzimática promove as respostas das células T-helper (TH)-2, levando à geração de IgE. É uma suposição razoável que a maioria das proteínas enzimáticas possui esse risco intrínseco. No entanto, os métodos toxicológicos para melhor caracterização do risco de sensibilização respiratória de enzimas individuais permanecem uma área problemática, com a consequência de que as informações disponíveis para a avaliação/gestão de risco, embora suficientes, sejam limitadas. A maior parte dessas informações foi gerada no passado em modelos animais e em imunoensaios in vitro que avaliam a reatividade cruzada imunológica. Em última análise, ao compreender de forma mais completa os mecanismos que impulsionam a resposta de IgE às enzimas, será possível desenvolver melhores métodos para a caracterização de perigo e consequentemente para a avaliação e a gestão de risco. © 2012 Informa Healthcare. Todos os direitos reservados.

Basketter, D.A., Broekhuizen, C., Fieldsend, M., Kirkwood, S., Mascarenhas, R., Maurer, K., Pedersen, C., Rodriguez, C., Schiff, H.-E.
“Defining occupational and consumer exposure limits for enzyme protein respiratory allergens under REACH”
Toxicology (268), pp. 165-170. (2010)


Resumo

Uma ampla variedade de substâncias tem sido reconhecida como sensibilizante, tanto para a pele como para o sistema respiratório. Muitas dessas substâncias são materiais úteis, portanto, para garantir que elas possam ser utilizadas com segurança, é necessário caracterizar os perigos e estabelecer limites de exposição adequados. De acordo com a nova legislação da União Europeia (REACH), há a necessidade de definir um nível derivado de exposição sem efeitos (DNEL, na sua sigla em inglês). Onde um DNEL não pode ser estabelecido, por exemplo, para substâncias sensibilizadoras, é recomendado um nível derivado de exposição com efeitos mínimos (DMEL, na sua sigla em inglês). Para as enzimas bacterianas e fúngicas que são sensibilizadores respiratórios bem reconhecidos e têm uso generalizado na indústria, bem como em uma variedade de produtos de consumo, um DMEL pode ser estabelecido por uma revisão retrospectiva completa da experiência ocupacional e do consumidor. Em particular, a definição dos dados de vigilância médica validados dos funcionários contra os registros de exposição gerados durante um longo período de tempo é vital para informar o DMEL ocupacional. Essa experiência mostra que um limite estabelecido há muito tempo de 60 ng/m3 para proteína de enzima pura tem sido um ponto de partida bem-sucedido na definição de limites de saúde ocupacional para sensibilização na indústria de detergentes. O uso de fatores de ajuste limitou a indução de sensibilização, evitou qualquer risco significativo de elicitação de sintomas com enzimas conhecidas e proporcionou um nível adequado de segurança para novas enzimas cuja potência não foi totalmente caracterizada. Por exemplo, na indústria de detergentes, isso levou ao uso geral de limites de exposição ocupacional 3–10 vezes menores do que o ponto de partida de 60 ng/m3. Em contrapartida, os limites de exposição do consumidor variam porque
os próprios tipos de exposição compõem uma ampla variedade. Os maiores níveis que se mostram seguros em uso, 15 ng/m3, estão associados ao uso de sprays para roupas, mas níveis muito baixos (por exemplo, 0,01 ng/m3) são comumente
associados a outros tipos de exposição segura. Os limites do consumidor geralmente se situarão entre esses valores e dependerão da exposição real associada ao uso do produto. © 2009 Elsevier Ireland Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Vinken, M., Doktorova, T., Ellinger-Ziegelbauer, H., Ahr, H.-J., Lock, E., Carmichael, P., Roggen, E., van Delft, J., Kleinjans, J., Castell, J., Bort, R., Donato, T., Ryan, M., Corvi, R., Keun, H., Ebbels, T., Athersuch, T., Sansone, S.-A., Rocca-Serra, P., Stierum, R., Jennings, P., Pfaller, W., Gmuender, H., Vanhaecke, T., Rogiers, V.
"The carcinoGENOMICS project: Critical selection of model compounds for the development of omics-based in vitro carcinogenicity screening assays"
Mutation Research-Reviews in Mutation Research, . Article in Press. (2008)

Resumo

Alterações recentes nas substâncias químicas na legislação europeia obrigaram a comunidade científica a acelerar a busca de métodos alternativos que poderiam substituir parcial ou totalmente a experimentação animal. O projeto do Programa Sixth Framework, carcinoGENOMICS, foi criado especificamente para o desenvolvimento de triagens in vitro baseadas em ômicas para testar o potencial carcinogênico de compostos químicos em um contexto pan-europeu. Este artigo fornece uma análise aprofundada da complexidade da escolha de compostos de referência adequados utilizados para a criação e ajuste de ensaios de carcinogenicidade in vitro. Primeiro, são definidos vários critérios sólidos para a seleção dos compostos modelo. Em segundo lugar, é descrita a estratégia seguida, incluindo os recursos consultados, e os compostos selecionados são brevemente ilustrados. Finalmente, são discutidas as limitações e os problemas encontrados durante o procedimento de seleção. Como a seleção de um conjunto adequado de substâncias químicas é um impedimento comum nos estágios iniciais de projetos de pesquisa semelhantes, as informações fornecidas neste artigo podem ser extremamente valiosas. © 2008.

 

Devin, M., Mortellaro, S.
"Catering for an animal-free culture"
Manufacturing Chemist, 79 (3), pp. 27-28. (2008)

Larsen, A.I., Johnsen, C.R., Frickmann, J., Mikkelsen, S.
"Incidence of respiratory sensitisation and allergy to enzymes among employees in an enzyme producing plant and the relation to exposure and host factors"
Occupational and Environmental Medicine, 64 (11), pp. 763-768. (2007)

Resumo

Objetivos: pertencentes ao grupo de sensibilizadores respiratórios de alto peso molecular, as enzimas microbianas foram relatadas como uma causa bem conhecida de alergia ocupacional, manifestando-se tipicamente como rinite e/ou asma. A elevada exposição a sensibilizadores de alto peso molecular, e possivelmente também exposições máximas, implica um risco maior do que uma baixa exposição, mas a relação exata entre a exposição, a sensibilização e a alergia clínica continua desconhecida. Os autores procuraram estimar o risco de alergia a enzimas respiratórias em uma indústria produtora de enzimas e avaliar a relação entre os índices de exposição e a alergia. Métodos: estudo de acompanhamento retrospectivo com base em dados coletados da vigilância da saúde desde 1970. Foram incluídos 1.207 funcionários da produção e de laboratórios. O nível de exposição da enzima nos departamentos relevantes foi estimado retrospectivamente em cinco níveis de exposição com base em aumentos/diminuições de 10 vezes o valor limite e outras informações de exposição. O risco foi estimado em um modelo de sobrevivência de regressão exponencial ajustado com intensidade constante para subperíodos de tempo utilizando a estimativa de máxima verossimilhança. Resultados: durante os três primeiros anos do trabalho de um funcionário, as taxas de incidência de alergia e sensibilização de enzimas foram de 0,13 e 0,03 por pessoa-ano em risco, respectivamente. Nos modelos ajustados, a classe de exposição não se correlacionou com as variáveis de resultado. O risco de sensibilização diminuiu ao longo das três décadas, enquanto o risco de alergia permaneceu inalterado. O risco de sensibilização e alergia foi o dobro entre os fumantes. A atopia pré-trabalho foi associada somente ao risco de sensibilização. Conclusão: a sensibilização às enzimas diminuiu durante o período de estudo, possivelmente refletindo melhorias no ambiente de trabalho. Uma diminuição semelhante não pôde ser demonstrada para a alergia a enzimas. Nenhum dos dois resultados se correlacionou com as estimativas de exposição, possivelmente devido à baixa precisão das estimativas.

 

Rovida, C., Basketter, D., Casati, S., De Silva, O., Hermans, H., Kimber, I., Manou, I., Weltzien, H.U., Roggen, E.
"Management of an integrated project (Sens-it-iv) to develop in vitro tests to assess sensitisation"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (3), pp. 317-322. (2007)

Resumo

O Sens-it-iv é um projeto integrado, financiado pelo European Commission Framework Programme 6, cujo objetivo geral é o desenvolvimento de testes in vitro e estratégias de teste a serem utilizados pelas indústrias química, cosmética e farmacêutica para avaliar o risco de potenciais sensibilizadores respiratórios e de contato. Esses testes, uma vez formalmente validados e aceitos, permitirão a avaliação do potencial de sensibilização dos produtos e entidades químicas novas e existentes das indústrias europeias para classificação e rotulagem, conforme exigido pela nova legislação REACH da UE sobre produtos químicos, ou para o propósito de avaliação de risco, conforme exigido pela 7ª Emenda à Diretiva de cosméticos da UE. A Sens-it-iv envolve 28 parceiros, representando indústrias, universidades e órgãos regulatórios, incluindo vários institutos nos Estados-Membros da UE e diferentes competências, todos com o objetivo comum de alcançar um produto final: o aumento da segurança dos produtos de consumo aliado à redução da experimentação com animais. Este artigo fornece uma visão geral da estrutura do projeto e uma descrição detalhada da organização de sua gestão.

 

Mortellaro, S., Devine, M.
"Advances in animal-free manufacturing of biopharmaceuticals"
BioPharm International, 20 (5 SUPPL.), pp. 30-37. (2007)

Kimber, I., Agius, R., Basketter, D.A., Corsini, E., Cullinan, P., Dearman, R.J., Gimenez-Arnau, E., Greenwell, L., Hartung, T., Kuper, F., Maestrelli, P., Roggen, E., Rovida, C., Casati, S.
"Chemical respiratory allergy: Opportunities for hazard identification and characterisation"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (2), pp. 243-265. (2007)

Basketter, D., Pease, C., Kasting, G., Kimber, I., Casati, S., Cronin, M., Diembeck, W., Gerberick, F., Hadgraft, J., Hartung, T., Marty, J.P., Nikolaidis, E., Patlewicz, G., Roberts, D., Roggen, E., Rovida, C., Van De Sandt, J.
"Skin sensitisation and epidermal disposition: The relevance of epidermal disposition for sensitisation hazard identification and risk assessment: The report and recommendations of ECVAM workshop 59a"
ATLA Alternatives to Laboratory Animals, 35 (1), pp. 137-154. (2007)

Roggen, E.L., Soni, N.K., Verheyen, G.R.
"Respiratory immunotoxicity: An in vitro assessment"
Toxicology in Vitro, 20 (8), pp. 1249-1264. (2006)

Resumo

Ainda não é possível avaliar in vitro a potência imunotóxica dos agentes respiratórios. A complexidade do endpoint e do sistema respiratório e a disponibilidade limitada de agentes respiratórios bem documentados são os principais motivos. A evidência de que células epiteliais (CEs) são estimuladas por compostos a expressar mediadores solúveis e proteínas de superfície in vitro estimulou seu uso no desenvolvimento de testes de imunotoxicidade respiratória. Foi avaliada uma variedade de linhagens de CEs e CEs das vias aéreas, mas as informações disponíveis parecem indicar as células alveolares humanas (por exemplo, A549) como o tipo de célula mais conveniente. Os formatos de teste baseados em CEs com vários graus de complexidade foram avaliados. Até o momento, foram obtidos resultados promissores usando um modelo 3D com a linhagem de células pulmonares A549 humanas. As células dendríticas (CDs) foram submetidas a pesquisas intensivas. No entanto, os testes atualmente disponíveis não são adequados para discernir a potência dos sensibilizadores. As explicações potenciais incluem a falta de protocolos padronizados para a geração de CDs, a ausência de padrões adequados para estimar a qualidade das culturas de CDs derivadas in vitro e a dinâmica limitada dos pontos finais atualmente utilizados. Os macrófagos alveolares (MAs) têm recebido menos atenção. Isso pode se mostrar injustificado, pois os macrófagos podem vincular respostas inatas à imunidade adaptativa. A observação de que CEs, CDs e MAs se afetam sugere que formatos de teste são necessários combinando pelo menos dois desses tipos de células se o objetivo for a classificação dos compostos de acordo com sua potência de sensibilização. Além disso, a capacidade dos compostos de atravessar uma membrana celular é uma propriedade importante de um composto imunotóxico, que pode ser avaliada apenas em modelos 3D de tecido humano reconstituído. Embora dados promissores tenham sido relatados para pele, o pulmão humano imunocompetente reconstituído em 3D continua a ser avaliado para a imunotoxicidade respiratória. Obviamente, o sucesso de qualquer um desses testes simplificados (em comparação com a complexidade da resposta imune) é altamente dependente da disponibilidade de biomarcadores de fase inicial (expressos a nível da barreira da mucosa), que são preditivos para mecanismos de imunotoxicidade relevantes que ocorrem a jusante na resposta imune. Até o momento esses biomarcadores ainda não estão disponíveis. © 2006 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Bindslev-Jensen, C., Skov, P.S., Roggen, E.L., Hvass, P., Brinch, D.S.
"Investigation on possible allergenicity of 19 different commercial enzymes used in the food industry"
Food and Chemical Toxicology, 44 (11), pp. 1909-1915. (2006)

Resumo

O objetivo do estudo foi investigar a segurança para pacientes alérgicos de 19 enzimas comercialmente disponíveis e aprovadas pelas autoridades que são utilizadas na indústria alimentícia. Enzimas produzidas por organismos geneticamente modificados foram incluídas. Foram incluídos quatrocentos pacientes adultos consecutivos com alergia a alérgenos inalatórios, alérgenos alimentares, abelhas ou vespas. Todos apresentaram pelo menos um teste cutâneo de alergia (prick test) positivo para os alérgenos acima. O teste cutâneo de alergia com as 19 enzimas fora realizado no antebraço e, em caso positivo (em 13 pacientes), a liberação in vitro de histamina de basófilos no sangue foi realizada. Os pacientes com resultados positivos no teste cutâneo de alergia subsequentemente foram recrutados com outras enzimas purificadas e, finalmente, foram desafiados oralmente com as enzimas em um protocolo duplo-cego e controlado por placebo. Foi observada apenas uma reação a um desafio de placebo. Em alguns casos, foi observado um resultado positivo do teste cutâneo de alergia ou uma liberação positiva de histamina induzida pelas enzimas, porém, como nenhum dos pacientes apresentou resultado positivo para qualquer uma das enzimas comerciais nos desafios orais subsequentes usando doses exageradas das enzimas em comparação com a ingestão diária normal, os resultados não têm relevância clínica. Uma grande variedade de classes e origens de enzimas foi incluída no estudo. Como não houve achados alergênicos de relevância clínica, concluiu-se que a ingestão de enzimas alimentares, em geral, não é considerada uma preocupação em relação à alergia alimentar. © 2006 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Mittag, D., Batori, V., Neudecker, P., Wiche, R., Friis, E.P., Ballmer-Weber, B.K., Vieths, S., Roggen, E.L.
"A novel approach for investigation of specific and cross-reactive IgE epitopes on Bet v 1 and homologous food allergens in individual patients"
Molecular Immunology, 43 (3), pp. 268-278. (2006)

Resumo

Retrospecto: uma reação alérgica clinicamente relevante requer o reconhecimento por IgE de pelo menos dois epítopos diferentes na superfície do alérgeno. Esses epítopos podem ser específicos ou de reatividade cruzada. Além disso, os padrões de reatividade da IgE podem ser específicos do paciente. O objetivo do nosso estudo foi comparar epítopos específicos e de reatividade cruzada da IgE e padrões de epítopos entre pacientes individuais. Utilizamos alergia alimentar relacionada com Bet v 1 como modelo. Métodos: cinco pacientes foram investigados por ELISA competitivo para IgE específica e de reatividade cruzada para Bet v 1 e seus homólogos Gly m 4 (soja), Ara h 8 (amendoim) e Pru av 1 (cereja). Os epítopos de IgE específicos de alérgeno e de reatividade cruzada foram avaliados por imunotransferência competitiva de uma biblioteca de peptídeos randomizados 7-mer com exibição em fagos utilizando IgE purificada policlonal a partir de soros individuais. Os imitadores de peptídeos resultantes foram mapeados na superfície da estrutura 3D dos alérgenos usando um algoritmo baseado em computador. Resultados: a imunotriagem competitiva e o mapeamento de epítopos identificaram padrões de epítopos da IgE específicos do paciente. No entanto, uma superfície de ligação à IgE reconhecida por todos os pacientes e duas reconhecidas por três pacientes foram identificadas nas quatro proteínas. Esses resultados são consistentes com a determinação da reatividade cruzada da IgE dos soros de pacientes individuais contra os quatro alérgenos recombinantes por ELISA competitivo. Conclusões: a seleção de imitadores de peptídeos com exibição em fagos com IgE sérica de pacientes alérgicos em combinação com o mapeamento baseado em computador dos imitadores de peptídeos na superfície da estrutura tridimensional de alérgenos é uma ferramenta inovadora e promissora para investigar a especificidade dos epítopos de IgE em pacientes individuais. Essas informações básicas sobre a estrutura dos epítopos podem ser usadas para a predição da reatividade cruzada e do potencial de alergenicidade de novos alimentos. © 2005 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Batori, V., Friis, E.P., Nielsen, H., Roggen, E.L.
"An in silico method using an epitope motif database for predicting the location of antigenic determinants on proteins in a structural context"
Journal of Molecular Recognition, 19 (1), pp. 21-29. (2006)

Resumo

Atualmente, a cristalografia de raios X de complexos de proteína e anticorpo ainda é o modo mais direto de identificar epítopos de células B. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de uma ferramenta de mapeamento de epítopos (EMT, na sua sigla em inglês) baseada em computador usando motivos de aminoácidos antigênicos como uma alternativa rápida em uma série de aplicações que não requerem informações detalhadas, por exemplo, desenvolvimento de proteínas farmacêuticas, vacinas e enzimas industriais. Usando Gal d 4 como uma proteína modelo, a EMT foi capaz de identificar, no contexto da proteína dobrada, as posições de aminoácidos conhecidas por estarem envolvidas na ligação do anticorpo. A alta sensibilidade e o valor preditivo positivo da EMT, bem como a relevância das associações estruturais sugeridas pela EMT, indicaram a existência de motivos de aminoácidos que provavelmente estão envolvidos em determinantes antigênicos. Além disso, o mapeamento diferencial revelou que a sensibilidade e o valor preditivo positivo foram dependentes da acessibilidade superficial relativa (RSA, na sua sigla em inglês) mínima dos aminoácidos incluídos no mapeamento, demonstrando que as EMTs são acomodadas pelo fato de que os epítopos são entidades tridimensionais com vários graus de acessibilidade. A comparação com as escalas de predição existentes demonstrou a superioridade da EMT em relação às escalas físico-químicas. A ferramenta de mapeamento também funcionou melhor do que as escalas estruturais disponíveis, mas a significância das diferenças continua não estabelecida. Portanto, a EMT tem potencial para se tornar uma alternativa rápida e simples à cristalografia de raios X para prever determinantes antigênicos estruturais se não forem necessárias informações detalhadas dos epítopos. Copyright © 2005 John Wiley & Sons, Ltd.

 

Lindstedt, M., Schiött, Å., Johnsen, C.R., Roggen, E., Johansson-Lindbom, B., Borrebaeck, C.A.K.
"Individuals with occupational allergy to detergent enzymes display a differential transcriptional regulation and cellular immune response"
Clinical and Experimental Allergy, 35 (2), pp. 199-206. (2005)

Resumo

Introdução: apesar de medidas de segurança significativas, a alergia às enzimas industriais continua a ser uma grande preocupação. A crescente prevalência de alergia ocupacional enfatiza a necessidade de investigar as propriedades funcionais das células dendríticas (CDs) expostas a enzimas, uma vez que as CDs possuem uma potente habilidade de ativar células T específicas para alérgenos. Objetivo: este estudo tem como objetivo elucidar os mecanismos moleculares subjacentes à resposta imune alérgica à lipase, uma enzima industrial. Para isso, estudamos o efeito da lipase hipoalergênica e do tipo selvagem na regulação transcricional em CDs e seu efeito estimulador nas células T CD4+ de memória. Métodos: cinco indivíduos com alergia à lipase documentada foram testados para a IgE sérica específica. As CDs desses indivíduos, estimulados com lipases, foram testadas quanto à sua capacidade de afetar a proliferação e a polarização das células T de memória. O efeito das lipases na atividade transcricional em CDs foi avaliado usando a análise de expressão global. Resultados: os níveis de IgE específica para lipase variaram consideravelmente entre os doadores, com o doador 4 exibindo os maiores níveis, e uma potente resposta de recuperação de células T CD4 + específica foi demonstrada apenas para o doador 4. Nenhuma diferença foi detectada no perfil de citocinas quando as células T do doador 4 foram cocultivadas com CDs pulsadas com lipase hipoalergênica ou do tipo selvagem, conforme demonstrado pela alta produção de IL-4 e IL-13 e baixa produção de IFN-γ. No entanto, as lipases induziram assinaturas genéticas diferentes nas CDs do doador 4 em comparação com os não respondentes. Conclusões: as CDs de indivíduos com alergia à lipase clinicamente diagnosticada apresentaram uma resposta diferencial à estimulação com lipases hipoalergênica e do tipo selvagem in vitro. Somente as CDs do doador 4 pulsadas com alérgeno foram capazes de induzir a proliferação de células T CD4+. As células T específicas para lipase apresentaram um fenótipo T-helper do tipo 2 que não foi alterado por CDs pulsadas com lipase hipoalergênica. Além disso, as CDs derivadas do doador 4 e estimuladas com qualquer uma das lipases exibiram perfis transcricionais diferentes em comparação com os outros doadores. Essas assinaturas representam genes de potencial importância para uma função imunorreguladora da CD em uma resposta alérgica em curso. © 2005 Blackwell Publishing Ltd.

 

Jakobsen, C.G., Bodtger, U., Kristensen, P., Poulsen, L.K., Roggen, E.L.
"Isolation of high-affinity human IgE and IgG antibodies recognising Bet v 1 and Humicola lanuginosa lipase from combinatorial phage libraries"
Molecular Immunology, 41 (10), pp. 941-953. (2004)

Resumo

Os fragmentos Fab específicos de alérgenos isolados das bibliotecas combinadas de IgE e IgG são ferramentas úteis para estudar as interações entre alérgenos e anticorpos. Para caracterizar a interação entre diferentes alérgenos e anticorpos, foram criadas bibliotecas recombinantes de anticorpos em fagos humanos no formato Fab. As bibliotecas de IgE e IgG humanas foram criadas a partir de pacientes alérgicos à lipase ou ao pólen de bétula. Essas bibliotecas foram usadas para selecionar ligantes que reconhecem o principal alérgeno do pólen de bétula Bet v 1 e a lipase de Humicola lanuginosa. Foi identificado um painel de anticorpos IgE e IgG específicos para alérgenos; esses foram melhor caracterizados por estudos de ligação a alérgenos utilizando Biacore e estudos de competição utilizando soros humanos e anticorpos purificados soros humanos. Foram registradas as afinidades no intervalo nM e foi observada uma competição com soros humanos para ligação a alérgenos. © 2004 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Ahmad, S.K., Brinch, D.S., Friis, E.P., Pedersen, P.B.
"Toxicological studies on lactose oxidase from microdochium nivale expressed in Fusarium venenatum"
Regulatory Toxicology and Pharmacology, 39 (3), pp. 256-270. (2004)

Resumo

Foi descoberta uma nova oxidase de carboidratos, a lactose oxidase, com alta especificidade de oxidação do dissacarídeo lactose em ácido lactobiônico. Essa enzima pode ser usada em uma variedade de aplicações. Foi realizado um programa de estudos toxicológicos para estabelecer a segurança da lactose oxidase como auxiliar de processamento na indústria alimentícia. A enzima utilizada neste estudo foi produzida por fermentação submersa de Fusarium venenatum e continha um código genético de Microdochium nivale. A administração oral a ratos de até 10 mL/kg de peso corporal (pc)/dia (equivalente a uma dosagem de sólidos orgânicos totais de 900 mg/kgpc/dia ou uma dosagem de lactose oxidase [LOX] de 344 unidades de LOX/kgpc/dia) por 13 semanas não causou nenhum efeito adverso. A lactose oxidase não se mostrou mutagênica no teste de mutação reversa bacteriana e nem causou aberrações cromossômicas em linfócitos humanos cultivados. A dose máxima recomendada de lactose oxidase é 50 ULOX/kg de concentrado de proteína de soro de leite líquido. A margem de segurança para a exposição é estimada em pelo menos 6,2 × 104 para o consumo diário de produtos lácteos. Em conclusão, a lactose oxidase pode ser considerada segura para uso na indústria alimentícia. © 2003 Elsevier Inc. Todos os direitos reservados.

 

J.T. Andersen; T. Schafer; P.L Jørgensen; S. Møller.
"Using inactivated microbial biomass as fertilizer: The fate of antibiotic resistance genes in the environment."
Research in Microbiology, 152(9), 823-833 (2001)

Resumo

O produto residual produzido pela Novo Nordisk A/S a partir de fermentações microbianas é usado como fertilizante agrícola na Dinamarca (NovoGro (TM)) após ter sido tratado por calor e produtos químicos para destruir os microrganismos. O fertilizante contém fragmentos de DNA dos microrganismos geneticamente modificados utilizados na produção industrial. Esse DNA contém genes que codificam os produtos industriais desejados, bem como genes utilizados como marcadores de seleção genética durante o desenvolvimento da cepa de produção. Os marcadores de resistência a antibióticos utilizados como marcadores de seleção genética são cloranfenicol, canamicina e ampicilina (Cm, Km e Ap, em suas respectivas siglas em inglês). O objetivo do presente estudo foi examinar se DNA e genes intactos estavam presentes no NovoGro e se ocorreu transferência horizontal de DNA isolado de cepas de produção inativadas no laboratório ou nos campos tratados com NovoGro. O DNA isolado do NovoGro foi analisado por PCR, e os genes intactos que codificam uma protease e a resistência ao cloranfenicol foram amplificados. Esse DNA isolado foi utilizado para experimentos in vitro, incluindo eletroporação e transformação, mas não foi observada transferência de DNA para Escherichia coli ou Bacillus subtilis. O perfil de resistência antibiótica da população bacteriana indígena nos campos tratados com NovoGro em comparação com os campos tratados com fertilizantes inorgânicos não mostrou diferenças. Além disso, o DNA isolado diretamente dos campos tratados com NovoGro por até 7 anos foi analisado por PCR e nenhuma construção específica de genes de produção pode ser detectada. (2002)
Introdução: apesar de medidas de segurança significativas, a alergia às enzimas industriais continua a ser uma grande preocupação. A crescente prevalência de alergia ocupacional enfatiza a necessidade de investigar as propriedades funcionais das células dendríticas (CDs) expostas a enzimas, uma vez que as CDs possuem uma potente habilidade de ativar células T específicas para alérgenos. Objetivo: este estudo tem como objetivo elucidar os mecanismos moleculares subjacentes à resposta imune alérgica à lipase, uma enzima industrial. Para isso, estudamos o efeito da lipase hipoalergênica e do tipo selvagem na regulação transcricional em CDs e seu efeito estimulador nas células T CD4+ de memória. Métodos: cinco indivíduos com alergia à lipase documentada foram testados para a IgE sérica específica. As CDs desses indivíduos, estimulados com lipases, foram testadas quanto à sua capacidade de afetar a proliferação e a polarização das células T de memória. O efeito das lipases na atividade transcricional em CDs foi avaliado usando a análise de expressão global. Resultados: os níveis de IgE específica para lipase variaram consideravelmente entre os doadores, com o doador 4 exibindo os maiores níveis, e uma potente resposta de recuperação de células T CD4 + específica foi demonstrada apenas para o doador 4. Nenhuma diferença foi detectada no perfil de citocinas quando as células T do doador 4 foram cocultivadas com CDs pulsadas com lipase hipoalergênica ou do tipo selvagem, conforme demonstrado pela alta produção de IL-4 e IL-13 e baixa produção de IFN-γ. No entanto, as lipases induziram assinaturas genéticas diferentes nas CDs do doador 4 em comparação com os não respondentes. Conclusões: as CDs de indivíduos com alergia à lipase clinicamente diagnosticada apresentaram uma resposta diferencial à estimulação com lipases hipoalergênica e do tipo selvagem in vitro. Somente as CDs do doador 4 pulsadas com alérgeno foram capazes de induzir a proliferação de células T CD4+. As células T específicas para lipase apresentaram um fenótipo T-helper do tipo 2 que não foi alterado por CDs pulsadas com lipase hipoalergênica. Além disso, as CDs derivadas do doador 4 e estimuladas com qualquer uma das lipases exibiram perfis transcricionais diferentes em comparação com os outros doadores. Essas assinaturas representam genes de potencial importância para uma função imunorreguladora da CD em uma resposta alérgica em curso. © 2005 Blackwell Publishing Ltd.

 

Jakobsen, C.G., Bodtger, U., Kristensen, P., Poulsen, L.K., Roggen, E.L.
"Isolation of high-affinity human IgE and IgG antibodies recognising Bet v 1 and Humicola lanuginosa lipase from combinatorial phage libraries"
Molecular Immunology, 41 (10), pp. 941-953. (2004)

Resumo

Os fragmentos Fab específicos de alérgenos isolados das bibliotecas combinadas de IgE e IgG são ferramentas úteis para estudar as interações entre alérgenos e anticorpos. Para caracterizar a interação entre diferentes alérgenos e anticorpos, foram criadas bibliotecas recombinantes de anticorpos em fagos humanos no formato Fab. As bibliotecas de IgE e IgG humanas foram criadas a partir de pacientes alérgicos à lipase ou ao pólen de bétula. Essas bibliotecas foram usadas para selecionar ligantes que reconhecem o principal alérgeno do pólen de bétula Bet v 1 e a lipase de Humicola lanuginosa. Foi identificado um painel de anticorpos IgE e IgG específicos para alérgenos; esses foram melhor caracterizados por estudos de ligação a alérgenos utilizando Biacore e estudos de competição utilizando soros humanos e anticorpos purificados soros humanos. Foram registradas as afinidades no intervalo nM e foi observada uma competição com soros humanos para ligação a alérgenos. © 2004 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

 

Ahmad, S.K., Brinch, D.S., Friis, E.P., Pedersen, P.B.
"Toxicological studies on lactose oxidase from microdochium nivale expressed in Fusarium venenatum"
Regulatory Toxicology and Pharmacology, 39 (3), pp. 256-270. (2004)

Resumo

Foi descoberta uma nova oxidase de carboidratos, a lactose oxidase, com alta especificidade de oxidação do dissacarídeo lactose em ácido lactobiônico. Essa enzima pode ser usada em uma variedade de aplicações. Foi realizado um programa de estudos toxicológicos para estabelecer a segurança da lactose oxidase como auxiliar de processamento na indústria alimentícia. A enzima utilizada neste estudo foi produzida por fermentação submersa de Fusarium venenatum e continha um código genético de Microdochium nivale. A administração oral a ratos de até 10 mL/kg de peso corporal (pc)/dia (equivalente a uma dosagem de sólidos orgânicos totais de 900 mg/kgpc/dia ou uma dosagem de lactose oxidase [LOX] de 344 unidades de LOX/kgpc/dia) por 13 semanas não causou nenhum efeito adverso. A lactose oxidase não se mostrou mutagênica no teste de mutação reversa bacteriana e nem causou aberrações cromossômicas em linfócitos humanos cultivados. A dose máxima recomendada de lactose oxidase é 50 ULOX/kg de concentrado de proteína de soro de leite líquido. A margem de segurança para a exposição é estimada em pelo menos 6,2 × 104 para o consumo diário de produtos lácteos. Em conclusão, a lactose oxidase pode ser considerada segura para uso na indústria alimentícia. © 2003 Elsevier Inc. Todos os direitos reservados.

 

J.T. Andersen; T. Schafer; P.L Jørgensen; S. Møller.
"Using inactivated microbial biomass as fertilizer: The fate of antibiotic resistance genes in the environment."
Research in Microbiology, 152(9), 823-833 (2001)

Resumo

O produto residual produzido pela Novo Nordisk A/S a partir de fermentações microbianas é usado como fertilizante agrícola na Dinamarca (NovoGro (TM)) após ter sido tratado por calor e produtos químicos para destruir os microrganismos. O fertilizante contém fragmentos de DNA dos microrganismos geneticamente modificados utilizados na produção industrial. Esse DNA contém genes que codificam os produtos industriais desejados, bem como genes utilizados como marcadores de seleção genética durante o desenvolvimento da cepa de produção. Os marcadores de resistência a antibióticos utilizados como marcadores de seleção genética são cloranfenicol, canamicina e ampicilina (Cm, Km e Ap, em suas respectivas siglas em inglês). O objetivo do presente estudo foi examinar se DNA e genes intactos estavam presentes no NovoGro e se ocorreu transferência horizontal de DNA isolado de cepas de produção inativadas no laboratório ou nos campos tratados com NovoGro. O DNA isolado do NovoGro foi analisado por PCR, e os genes intactos que codificam uma protease e a resistência ao cloranfenicol foram amplificados. Esse DNA isolado foi utilizado para experimentos in vitro, incluindo eletroporação e transformação, mas não foi observada transferência de DNA para Escherichia coli ou Bacillus subtilis. O perfil de resistência antibiótica da população bacteriana indígena nos campos tratados com NovoGro em comparação com os campos tratados com fertilizantes inorgânicos não mostrou diferenças. Além disso, o DNA isolado diretamente dos campos tratados com NovoGro por até 7 anos foi analisado por PCR e nenhuma construção específica de genes de produção pode ser detectada. (2002)